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Eugênia Ribeiro Valadareshttp://lattes.cnpq.br/4554170778852492Ana Lúcia Brunialti Godardhttp://lattes.cnpq.br/0875119265298438Talita Émile Ribeiro Adelino2024-03-11T17:30:27Z2024-03-11T17:30:27Z2012-02-28http://hdl.handle.net/1843/65663A Doença de Gaucher (DG) é a doença de depósito lisossomal mais comum. Ela é causada pela deficiência da enzima lisossomal glicocerebrosidase, com acúmulo de substrato nos lisossomos de macrófagos, principalmente no fígado, baço e medula óssea, podendo afetar pulmão, rins e sistema nervoso central. O espectro da doença é bastante amplo, mas classicamente são reconhecidos três tipos. A DG tipo 1 ou forma não neuronopática, é a forma mais frequente da doença, com tratamento por terapia de reposição enzimática (TRE) ou por terapia de redução do substrato (TRS). A quitotriosidase (QT), uma quitinase humana, está de 100 a 1.000 vezes mais elevada que o normal em pacientes com DG. A atividade de QT diminui após o início do tratamento (TRE ou TRS) e aumenta quando ele é interrompido. Assim, sua atividade é útil para monitoramento da gravidade da doença e efetividade do tratamento de pacientes com DG. Entretanto, a literatura relata que aproximadamente 6% da população geral é homozigota para uma duplicação de 24 pb no éxon 11 de CHIT1 (dup24) e não produz QT, o que torna seu uso sem valor. Outros 35% da população é heterozigota para a mutação e produz apenas metade da enzima ativa. Dessa forma, para que a QT possa ser utilizada como marcador bioquímico em pacientes com DG, é importante que o genótipo de CHIT1 seja conhecido. Com o objetivo de caracterizar molecular e bioquimicamente a QT nos pacientes com DG tipo 1 em Minas Gerais, uma amostra de 33 pacientes do Hospital das Clínicas da UFMG (HC-UFMG) foi estudada, todos já em tratamento, e comparada com controles normais. A técnica da dosagem enzimática foi realizada conforme descrito por Hollak e colaboradores (1994). A genotipagem dup24 foi realizada por PCR, conforme método proposto por Boot e colaboradores (1998) e os polimorfismos G102S, G354R e A442V em CHIT1 foram analisados por sequenciamento do DNA genômico. De forma geral, a atividade de QT foi 176 vezes mais elevada nos pacientes com DG tipo 1 do que nos indivíduos saudáveis. O resultado da genotipagem revelou que 23 pacientes (70%) são homozigotos normais (wt/wt), 7 (21%) heterozigotos (wt/mut) e 3 (9%) homozigotos para dup24 (mut/mut). Três pacientes com DG tipo 1 apresentaram atividade de QT muito abaixo do esperado e, por isso, foram submetidos à pesquisa de polimorfismos em CHIT1 associados com redução da atividade de QT. Dois pacientes com DG tipo 1 apresentaram um polimorfismo no éxon 4 (G102S) enquanto o outro apresentou duas alterações no éxon 11 (G354R e deleção de 4pb na junção éxon/íntron 11). Essa pesquisa foi desenvolvida para atender a necessidade de melhor acompanhamento dos pacientes com DG tipo 1 no HC-UFMG e seus resultados mostram a QT como marcador útil para 82% da população estudada.Gaucher disease (GD) is the most common lysosomal storage disease. It is caused by deficiency of the enzyme glucocerebrosidase, with accumulation of substrate in the lysosomes of the macrophages, mainly in the liver, spleen and bone marrow, which can affect the lungs, kidneys and central nervous system. The spectrum of disease is broad, but classically three types are recognized. The GD type 1 or non-neuronopathic form, is the most common form of the disease, with possibility of treatment with enzyme replacement therapy (ERT) or substrate reduction therapy (SRT). The chitotriosidase (ChT), a human chitinase, is 100 to 1,000 times higher than normal in patients with GD. The ChT activity decreases after initiation of therapy (ERT or SRT) and increases when it is stopped. Thus, their activity is useful for monitoring disease severity and effectiveness of treatment of patients with GD. However, the literature reports that approximately 6% of the population is homozygous for a duplication of 24 bp in exon 11 of CHIT1 (dup24) and does not produce ChT, which makes this enzyme useless in this case. Another 35% of the population is heterozygous for the mutation and produces only half the active enzyme. Thus, for the ChT can be used as a biochemical marker in patients with GD, it is essential that the CHIT1 genotype is known. In order to characterize molecular and biochemically the ChT in patients with GD type 1 in Minas Gerais state, a sample of 33 patients from Hospital das Clinicas (HC-UFMG) was studied, all under treatment, and compared with normal controls. The enzyme measurement assay was implemented and standardized at the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism (HC-UFMG) and genotyping, performed at the Laboratory of Animal and Human Genetics (UFMG). In general, the ChT activity was 176 times higher in patients with GD type 1 than in healthy individuals. The result of genotyping revealed that 23 patients (70%) are homozygous normal (wt/wt), 7 (21%) heterozygous (wt/mut) and 3 (9%) were homozygous for dup24 (mut/mut). Three patients showed no correlation between dup24 genotype and ChT activity and, therefore, were tested for polymorphisms in CHIT1. Of these, two showed a polymorphism in exon 4 (G102S) while another had two polymorphisms in exon 11 (G354R and 4 pb deletion at the junction of exon/intron 11). This research was performed due the need for better monitoring of patients with GD type 1 in the HC-UFMG and the results show the ChT as useful marker for 82% of this population.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em GenéticaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA GERALhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessGenéticaDoença de GaucherElastase de LeucócitoDoença de Gaucher (DG)Enzima Lisossomal GlicocerebrosidaseEstudo bioquímico e molecular da quitotriosidase em pacientes com Doença de Gaucher tipo 1 em Minas Geraisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALDissertação de mestrado - Talita Adelino.pdfDissertação de mestrado - Talita Adelino.pdfapplication/pdf633015https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/65663/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20de%20mestrado%20-%20Talita%20Adelino.pdff831ba8166eb9f64c7db347a25ab9155MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/65663/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/65663/3/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD531843/656632024-03-11 14:30:28.522oai:repositorio.ufmg.br:1843/65663TElDRU7Dh0EgREUgRElTVFJJQlVJw4fDg08gTsODTy1FWENMVVNJVkEgRE8gUkVQT1NJVMOTUklPIElOU1RJVFVDSU9OQUwgREEgVUZNRwoKQ29tIGEgYXByZXNlbnRhw6fDo28gZGVzdGEgbGljZW7Dp2EsIHZvY8OqIChvIGF1dG9yIChlcykgb3UgbyB0aXR1bGFyIGRvcyBkaXJlaXRvcyBkZSBhdXRvcikgY29uY2VkZSBhbyBSZXBvc2l0w7NyaW8gSW5zdGl0dWNpb25hbCBkYSBVRk1HIChSSS1VRk1HKSBvIGRpcmVpdG8gbsOjbyBleGNsdXNpdm8gZSBpcnJldm9nw6F2ZWwgZGUgcmVwcm9kdXppciBlL291IGRpc3RyaWJ1aXIgYSBzdWEgcHVibGljYcOnw6NvIChpbmNsdWluZG8gbyByZXN1bW8pIHBvciB0b2RvIG8gbXVuZG8gbm8gZm9ybWF0byBpbXByZXNzbyBlIGVsZXRyw7RuaWNvIGUgZW0gcXVhbHF1ZXIgbWVpbywgaW5jbHVpbmRvIG9zIGZvcm1hdG9zIMOhdWRpbyBvdSB2w61kZW8uCgpWb2PDqiBkZWNsYXJhIHF1ZSBjb25oZWNlIGEgcG9sw610aWNhIGRlIGNvcHlyaWdodCBkYSBlZGl0b3JhIGRvIHNldSBkb2N1bWVudG8gZSBxdWUgY29uaGVjZSBlIGFjZWl0YSBhcyBEaXJldHJpemVzIGRvIFJJLVVGTUcuCgpWb2PDqiBjb25jb3JkYSBxdWUgbyBSZXBvc2l0w7NyaW8gSW5zdGl0dWNpb25hbCBkYSBVRk1HIHBvZGUsIHNlbSBhbHRlcmFyIG8gY29udGXDumRvLCB0cmFuc3BvciBhIHN1YSBwdWJsaWNhw6fDo28gcGFyYSBxdWFscXVlciBtZWlvIG91IGZvcm1hdG8gcGFyYSBmaW5zIGRlIHByZXNlcnZhw6fDo28uCgpWb2PDqiB0YW1iw6ltIGNvbmNvcmRhIHF1ZSBvIFJlcG9zaXTDs3JpbyBJbnN0aXR1Y2lvbmFsIGRhIFVGTUcgcG9kZSBtYW50ZXIgbWFpcyBkZSB1bWEgY8OzcGlhIGRlIHN1YSBwdWJsaWNhw6fDo28gcGFyYSBmaW5zIGRlIHNlZ3VyYW7Dp2EsIGJhY2stdXAgZSBwcmVzZXJ2YcOnw6NvLgoKVm9jw6ogZGVjbGFyYSBxdWUgYSBzdWEgcHVibGljYcOnw6NvIMOpIG9yaWdpbmFsIGUgcXVlIHZvY8OqIHRlbSBvIHBvZGVyIGRlIGNvbmNlZGVyIG9zIGRpcmVpdG9zIGNvbnRpZG9zIG5lc3RhIGxpY2Vuw6dhLiBWb2PDqiB0YW1iw6ltIGRlY2xhcmEgcXVlIG8gZGVww7NzaXRvIGRlIHN1YSBwdWJsaWNhw6fDo28gbsOjbywgcXVlIHNlamEgZGUgc2V1IGNvbmhlY2ltZW50bywgaW5mcmluZ2UgZGlyZWl0b3MgYXV0b3JhaXMgZGUgbmluZ3XDqW0uCgpDYXNvIGEgc3VhIHB1YmxpY2HDp8OjbyBjb250ZW5oYSBtYXRlcmlhbCBxdWUgdm9jw6ogbsOjbyBwb3NzdWkgYSB0aXR1bGFyaWRhZGUgZG9zIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzLCB2b2PDqiBkZWNsYXJhIHF1ZSBvYnRldmUgYSBwZXJtaXNzw6NvIGlycmVzdHJpdGEgZG8gZGV0ZW50b3IgZG9zIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIHBhcmEgY29uY2VkZXIgYW8gUmVwb3NpdMOzcmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgZGEgVUZNRyBvcyBkaXJlaXRvcyBhcHJlc2VudGFkb3MgbmVzdGEgbGljZW7Dp2EsIGUgcXVlIGVzc2UgbWF0ZXJpYWwgZGUgcHJvcHJpZWRhZGUgZGUgdGVyY2Vpcm9zIGVzdMOhIGNsYXJhbWVudGUgaWRlbnRpZmljYWRvIGUgcmVjb25oZWNpZG8gbm8gdGV4dG8gb3Ugbm8gY29udGXDumRvIGRhIHB1YmxpY2HDp8OjbyBvcmEgZGVwb3NpdGFkYS4KCkNBU08gQSBQVUJMSUNBw4fDg08gT1JBIERFUE9TSVRBREEgVEVOSEEgU0lETyBSRVNVTFRBRE8gREUgVU0gUEFUUk9Dw41OSU8gT1UgQVBPSU8gREUgVU1BIEFHw4pOQ0lBIERFIEZPTUVOVE8gT1UgT1VUUk8gT1JHQU5JU01PLCBWT0PDiiBERUNMQVJBIFFVRSBSRVNQRUlUT1UgVE9ET1MgRSBRVUFJU1FVRVIgRElSRUlUT1MgREUgUkVWSVPDg08gQ09NTyBUQU1Cw4lNIEFTIERFTUFJUyBPQlJJR0HDh8OVRVMgRVhJR0lEQVMgUE9SIENPTlRSQVRPIE9VIEFDT1JETy4KCk8gUmVwb3NpdMOzcmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgZGEgVUZNRyBzZSBjb21wcm9tZXRlIGEgaWRlbnRpZmljYXIgY2xhcmFtZW50ZSBvIHNldSBub21lKHMpIG91IG8ocykgbm9tZXMocykgZG8ocykgZGV0ZW50b3IoZXMpIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcyBkYSBwdWJsaWNhw6fDo28sIGUgbsOjbyBmYXLDoSBxdWFscXVlciBhbHRlcmHDp8OjbywgYWzDqW0gZGFxdWVsYXMgY29uY2VkaWRhcyBwb3IgZXN0YSBsaWNlbsOnYS4KRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2024-03-11T17:30:28Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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