Efeito da triiodotironina (T3) na diferenciação osteogênica in vitro de células tronco mesenquimais da medula óssea de ratas

• Autor(a) principal: Jankerle Neves Boeloni
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/LGPD-7JUGDJ
• topic: Células tronco mesenquimais; diferenciação osteogênica; triiodotironina; ratas; Rato como animal de laboratório; Células tronco; Células

O objetivo deste estudo foi verificar o efeito dose dependente de T3 na diferenciação osteogênica de CTM de ratas. Utilizaram-se fêmur e tíbia de ratas Wistar (30 dias) para extração das CTM da medula óssea, cultivadas em DMEM enriquecido e soro fetal bovino a 37oC e 5% de CO2. Após quatro repiques, 1x105 CTM foram cultivadas em triplicata em DMEM enriquecido acrescido de ácido ascórbico, -glicerofosfato e dexametasona por 7, 14 e 21 dias com T3 (doses de 10-3nM, 10-2nM, 1nM e 100 nM) e sem T3 (controle). A caracterização fenotipica das células foi realizada antes da diferenciação osteogênica por citometria de fluxo. Durante a diferenciação osteogênica, foi avaliada a atividade da fosfatase alcalina pelo ensaio BCIP-NBT e a capacidade de conversão do MTT em cristais de formazan, ambos por espectrofotometria. O colágeno foi corado pelo sirius red, dosado em espectrofotômetro e avaliado em microscopia de campo escuro. Nódulos de mineralização foram corados pelo Von Kossa para avaliação do número de nódulos/campo e do diâmetro médio dos nódulos. As médias foram comparadas pelo teste SNK. Antes da diferenciação osteogênica, as células apresentaram expressão de CD73 (93,99%), CD54 (95,10%) e CD90 (86,77%) e ausência de expressão de CD45 (96,94%). A dose de 100nM apresentou efeito negativo na diferenciação osteogênica de CTM, com menor síntese de colágeno em comparação ao controle com formação de inúmeros cristais de fosfato de cálcio. A dose de 10-3nM apresentou síntese de colágeno, atividade de fosfatase alcalina e número de nódulos de mineralização superiores ao controle e semelhantes à dose de 10-2nM. Mas, 10-2nM demonstrou resultados ainda melhores sob a diferenciação osteogênica das CTM, havendo maior redução do MTT, melhor maturação do colágeno e maior diâmetro médio dos nódulos de mineralização. Conclui-se que o efeito de T3 na diferenciação in vitro das CTM é dose dependente, sendo 10-2nM a dose que promove melhor diferenciação osteogênica das CTM da medula óssea