Padronização de um método imuno-histoquímico para confirmação da Leishmaniose tegumentar

• Autor(a) principal: Cibele Fontes Alves
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-93CNFV
• topic: Leishmania braziliensis; Imuno-histoquímica; Diagnóstico; Leishmaniose tegumentar americana; Patologia; Imunoistoquímica/métodos; Leishmaniose mucocutânea/diagnóstico; Leishmaniose/patologia; Leishmaniose; Análise parasitológica; Patologia; Medicina tropical; Dermatologia

A leishmaniose tegumentar americana (LTA), como conhecida nas Américas, trata-se de uma infecção dermatológica resultante da multiplicação intracelular de formas amastigotas de Leishmania em células do sistema fagocítico mononuclear. O diagnóstico precoce e correto da LTA é fundamental para o estabelecimento de um tratamento efetivo, porém, os métodos diagnósticos atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade, custo elevado ou demandam ampla estrutura técnica e laboratorial. Assim, o objetivo principal desse trabalho foi padronizar um método parasitológico imuno-histoquímico para o diagnóstico de certeza da LTA. A padronização baseou-se em um protocolo previamente descrito por TAFURI et al., (2004), na literatura, utilizando-se o método imuno-histoquímico da estreptoavidina peroxidase, que empregou como anticorpo primário, soro hiperimune de cão naturalmente infectado por Leishmania infantum chagasi. As amostras foram obtidas de 73 pacientes com LTA, não submetidos a qualquer tratamento, procedentes do Ambulatório de Leishmanioses Dr. Paulo de Araújo Magalhães, Caratinga/MG, Todos os pacientes apresentavam lesões típicas da forma localizada da LTA, que variou de uma a quatro lesões, localizadas, sobretudo, em áreas expostas do corpo e com tempo de evolução de 15 a 180 dias. Em sua maioria eram lavradores, residentes na zona rural, pertenciam a ambos os sexos e à faixa etária de 16 a 45 anos. Fragmentos de pele obtidos de biópsias cutâneas foram fixados em solução de formol tamponado e incluídos em parafina. Para a visualização da ligação do anticorpo primário com antígenos de espécies de Leishmania que causam LTA, utilizou-se o complexo da estreptoavidina peroxidase e um polímero livre de biotina. Como exames complementares ao método imuno-histoquímico proposto, foram realizados estudos histológicos por Hematoxilina e Eosina (HE), imuno-histoquímicos empregando-se anticorpo monoclonal anti-lipofosfoglicano (LPG) de Leishmania e a reação em cadeia da polimerase (PCR). As principais alterações histopatológicas apresentadas foram acantose e papilomatose, além de hiperceratose e paraceratose. Na derme observou-se moderado a acentuado infiltrado inflamatório crônico difuso de células mononucleares, principalmente plasmócitos, macrófagos e linfócitos, além de algumas células gigantes do tipo Langhans. Não foi observada reação granulomatosa típica (granuloma completo) e, em algumas amostras foram identificadas áreas de necrose fibrinoíde. A técnica proposta foi padronizada e as formas amastigotas de Leishmania foram facilmente identificadas, com coloração acastanhada, conformação arredondada, em 91,78% dos fragmentos de pele da amostra, sem a ocorrência de coloração de fundo inespecífica (background). A técnica padronizada apresentou elevada sensibilidade para a identificação das amastigotas, que ocorreu de forma mais fácil e rápida, quando comparada com a pesquisa do parasito através da coloração pela Hematoxilina e Eosina, com 17,81% de positividade e pela técnica de imuno-histoquímica, que usou anticorpo monoclonal anti-LPG, que apresentou 71,23% de positividade. O resultado da PCR, embora tenha revelado 100% de positividade, não mostrou diferença estatisticamente significativa quando comparado ao método de imuno-histoquímica (p=0,7671). O uso do polímero livre de biotina como sistema de visualização na técnica de imuno-histoquímica, com soro hiperimune de cão infectado, permitiu reduzir de forma notável o tempo de realização da técnica (de 24 horas para 06 horas), sem elevação do custo final da reação. Conclui-se que o método de imuno-histoquímica padronizado, permitiu o diagnóstico de certeza da LTA com, baixo custo, rapidez e fácil execução quando comparado com outras técnicas de imuno-histoquímica e a PCR.