Análise da função biológica da molécula orientadora por repulsão a1 (RGMA1) durante o estabelecimento de precursores musculares em somitos de embriões de galinha in vitro

• Autor(a) principal: Rayan Silva de Paula
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33877
• topic: RGMa1; RCAS; Somito; Embrião de galinha; Músculo esquelético; Biologia Celular; Somitos; Embrião de Galinha; Músculo Esquelético

A Molécula Orientadora por Repulsão a (RGMa) é uma proteína que foi primariamente relacionada à axonogênese, atuando via os receptores Neogenina e/ou como co-receptores da sinalização BMP. O padrão de expressão de RGMa durante o desenvolvimento do embrião de galinha sugeriu novas funções para esta molécula, incluindo a somitogênese e miogênese. Nosso grupo identificou uma isoforma de RGMa expressa exclusivamente em somitos, estruturas embrionárias transientes que originam as células musculares esqueléticas do tronco e as células-tronco musculares. Este estudo teve como objetivo caracterizar a sequência desta isoforma, denominada RGMa1; e investigar sua função biológica em células de somitos de embriões de galinha. A sequência de nucleotídeos revelou que RGMa1 é produto de um splicing alternativo que ocorre sobre a sequência de RGMa, removendo completamente o domínio que codifica a porção N-terminal da proteína. Estes resultados sugerem que RGMa1 exerce sua função nos somitos de forma ancorada à membrana plasmática. A análise funcional foi realizada por meio as superexpressão de RGMa1 em células de somitos de embriões de galinha no estágio de 33-35h (HH10), compondo nos seguintes grupos: (i) somitos epiteliais caudais; (ii) somitos epiteliais associados ao tubo neural e notocorda; (iii) somitos maduros craniais; e (iv) somitos maduros associados às estruturas axiais. A superexpressão de RGMa1 foi capaz de induzir a expressão dos fatores pré-miogênicos (Pax3/Pax7) e miogênicos (MyoD/Miogenina/Desmina) nas células dos grupos (i), (ii) e (iii). O grupo (iii) induziu ainda a expressão do fator miogênico Myf5 e de α-actinina. A superexpressão de RGMa1 nas células do grupo (iv) induziram um resultado oposto: todos os marcadores testados foram identificados como reprimidos. Estes resultados sugerem uma importante função para RGMa1 durante o estabelecimento das células satélites e da linhagem miogênica durante o desenvolvimento dos somitos ainda epiteliais; mas que sua expressão é regulada por fatores expressos pelas estruturas axiais após a maturação dos somitos. Foi observado ainda que os efeitos exercidos por RGMa1 sobre a expressão dos marcadores pré-miogênicos e miogênicos não parecem ser exercidos pela ligação de RGMa1 aos receptores Neogenina ou da via BMP, já que seus respectivos sinalizadores secundários não apresentaram alterações coerentes com os efeitos observados. Nossos resultados contribuem para adicionar RGMa1 como um novo fator envolvido com a determinação miogênica nos somitos, um programa molecular que tem com aplicações médicas e potencial biotecnológico para o melhoramento de animais de corte