Identificação de hemoglobinas com corrida eletroforética semelhante à da hemoglobina S no Programa Estadual de Triagem Neonatal de Minas Gerais (PETN-MG)

• Autor(a) principal: Fernanda Silva Pimentel
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/MEDD-8E3HEM
• topic: Hemoglobinopatias; Triagem neonatal; Eletroforese DeCs; Anemia falciforme; Triagem neonatal; Talassemia alfa; Hemoglobina falciforme

Introdução: A triagem neonatal é de suma importância para a identificação de crianças com HbS. A incidência da doença falciforme em MG é 1:1.400 recém-nascidos. Há pelo menos três hemoglobinas variantes de cadeia beta e quatro de alfa, cujos pontos isoelétricos são semelhantes ao da HbS, o que pode levar ao diagnóstico falso positivo para traço ou doença falciforme. Objetivos: a) diferenciar a HbS de outras variantes com propriedades semelhantes na IEF; b) sequenciar uma variante encontrada em duas crianças homozigotas c) avaliar a relevância clínica desta variante. Métodos: Foram estudadas 126 crianças que tiveram os resultados da triagem neonatal lidos como indeterminados. Confirmação pela IEF no sexto mês de vida mostrou uma variante com mobilidade da HbS. Foram colhidas novas amostras e os géis de IEF foram lidos em duplicata, por três observadores independentes. As variantes foram classificadas, de forma tentativa, como mais rápidas (+0,5 mm), indistinguíveis ou mais lentas (-0.5 mm) do que o controle Hb S. Foi realizada PCR alelo-específica para o gene S em todos os casos; PCR multiplex para as sete deleções da Ñ-talassemia foi realizada nas duas famílias com homozigose da Hb variante. Os genes da alfa-globina foram sequenciados em ambos os casos e o gene beta, no primeiro caso. NCBI NG_000006.1 foi a sequência de referência para o gene . Resultados: 62 crianças foram inicialmente diagnosticadas pelo programa como sendo Hb AS, 62 AV e 2 VV (V = Hb "rara"). Das 756 leituras (126x3x2 = 756) das IEFs, as Hbs foram classificadas como sendo mais rápidas do que a S-controle em 56,7%, mais lentas em 5,4% e indistinguíveis em 35%. A concordância intraobservador variou entre 63,2% e 77,5%. A concordância tríplice interobservador foi de apenas 23,3%. Em 12 casos (9,5%) a PCR para o gene S foi positiva; o padrão de IEF foi mais rápido em 29% de leituras e indistinguíveis de S em 71%. Não havia parentesco conhecido entre as famílias das duas crianças homozigotas. Casamento consanguíneo estava presente em ambas as famílias. A IEF mostrou em ambas as crianças uma única banda com mobilidade da Hb S. A IEF dos pais mostrou o fenótipo AS. O teste de falcização e a PCR alelo-específica para ÒS foram negativos. O sequenciamento do gene Ò na primeira família foi normal. A PCR multiplex para as deleções da Ñ-talassemia revelou que ambas as crianças eram -3.7/-3.7 e todos os pais /-3.7. O sequenciamento do gene híbrido 3.7 revelou uma mutação no códon 78 (AAC> AAA; Asn> Lys; Hb Stanleyville-II), em homozigose para as crianças e em heterozigose para todos os pais. Foi detectada 3.7 do tipo I no gene híbrido: o crossing-over ocorreu a 5 'do sítio de restrição da ApaI, no IVS-2, do gene primitivo 1. Ambas as crianças tinham anemia hipocrômica e leve microcitose, como esperado para pacientes com -3.7 /-3.7. Conclusões: A classificação proposta para Hb S-like por IEF é inadequada. Muitos variantes "indistinguíveis" por IEF foram confirmadas como Hb não-S. Algumas Hb S verdadeiras foram lidas como mais "rápida" do que a S-controle. Contudo a Hb S verdadeira nunca foi lida como mais "lenta" e, portanto, é uma boa pista para o diagnóstico diferencial. Métodos moleculares elucidarão as variantes "raras". Duas dessas crianças, tinham homozigose para a talassemia -3.7 (tipo I) associada à Hb Stanleyville ( 78 Asn>Lys), no estado de homozigose (2Staß2). Os pais foram heterozigotos para ambas as mutações. Microcitose e hipocromia refletem o quadro típico da -talassemia-1.