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Carlos Delfin Chavez OlorteguiRubens Antonio CarneiroStella Maria Barrouin-MeloMiguel Angel Chavez Fumagalli2019-08-12T05:16:35Z2019-08-12T05:16:35Z2008-08-21http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AF3SJBLeishmania amazonensis e um dos principais agentes etiologicos em um amplo espectro de formas clinicas de leishmanioses e apresenta ampla distribuicao geografica nas Americas, que coincide com areas comuns de transmissao de outras especies de Leishmania. Neste trabalho, a eficacia protetora induzida pela imunizacao com o polimero formado por dois peptideos sinteticos selecionados pelas tecnicas dePhage Display e Spot synthesis foi avaliada em camundongos BALB/c contra a infeccaodesafio com L. amazonensis. Os peptideos foram selecionados utilizando anticorpos da classe IgG purificados a partir de uma mistura de amostras de soro de caes com leishmaniose visceral. Foram obtidos tres clones de bacteriofagos expressando peptideos de interesse que apresentaram maior especificidade em relacao aosanticorpos IgGs purificados. Os peptideos sinteticos foram sintetizados pelo metodo de Spot synthesis (tecnica de sintese quimica de peptideos em membranas de celulose) e testados em experimentos de screening. Dois peptideos (denominados de 11H e 12A) foram reconhecidos pela tecnica de Spot synthesis e foram sintetizados nas suas formas soluveis; em seguida, foram conjugados covalentemente com glutaraldeido, originando um polimero de aproximadamente 30 kDa e nesta forma, usados como imunogeno. A imunizacao com o polimero foi capaz de induzir uma elevada resposta imune Th1 antes da infeccao. Apos o desafio, uma producao elevada de IFN-, baixos niveis de IL-4, IL-10 e anticorpos especificos ao parasita foram observados nestesanimais. Em contraste, camundongos dos grupos controle exibiram baixos niveis de IFN e niveis elevados de IL-4, IL-10 e anticorpos anti-parasita. Dessa forma, o polimero composto pelos dois peptideos mostrou-se como um bom candidato a vacina contra a Leishmaniose Tegumentar Americana.Leishmania amazonensis is one of the major etiologic agents of a broad spectrum of clinical forms of leishmaniasis and has a wide geographical distribution in Americas, which overlaps with the areas of transmission of many other Leishmania species. In this work, the protective efficacy induced by immunization with a polymer originatedfrom two synthetic peptides selected by Phage Display and Spot-Synthesis techniques was evaluated in BALB/c mice against L. amazonensis challenge infection. Phagedisplayed peptides were screened using IgGs antibodies purified from serum samplesof dogs with active visceral leishmaniasis. Three clones were found to interact with antibodies and the corresponding synthetic peptides were synthesized by the Spot-Synthesis method on cellulose membrane. In the screening using the peptides, two of them (named 11H and 12A) were recognized in Spot-ELISA and, synthesized in their soluble form, covalently conjugated with glutaraldehyde originating a polymer ofapproximately 30 kDa and these was used as immunogen. Immunization with polymer was able to induce a Th1 immune response prior to infection. After challenge infection, a sustained IFN- production, low levels of IL-4, IL-10 and specific antiparasite antibodies were detected in this mices. In contrast, mice of the control groups displayed low levels of IFN- and high levels from IL-4, IL-10 and specific anti-parasiteantibodies. We concluded that the use of synthetic peptides can be an alternative approach to generate vaccines against American Tegumentary Leishmaniasis.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGFarmacologiaPhage displayVacinaSpot synthesispeptideo sintéticoLeishmania amazonensisProteção contra a infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis pela imunização de camundongos BALB/c com peptídeos sintéticos selecionados por phage display e spot synthesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALppgfarmacologiabioqmolecular_miguelangelchavezfumagalli_dissertacaomestrado.pdfapplication/pdf1348479https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-AF3SJB/1/ppgfarmacologiabioqmolecular_miguelangelchavezfumagalli_dissertacaomestrado.pdf1bdbfd547b6b9df780bfd419df35b1ebMD51TEXTppgfarmacologiabioqmolecular_miguelangelchavezfumagalli_dissertacaomestrado.pdf.txtppgfarmacologiabioqmolecular_miguelangelchavezfumagalli_dissertacaomestrado.pdf.txtExtracted texttext/plain133149https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-AF3SJB/2/ppgfarmacologiabioqmolecular_miguelangelchavezfumagalli_dissertacaomestrado.pdf.txtfb33677874ef5285e5fea1f36d90c6d3MD521843/BUBD-AF3SJB2019-11-14 08:18:49.8oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-AF3SJBRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T11:18:49Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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