Cálcio intracelular na proliferação de células hepáticas

• Autor(a) principal: Viviane Aguiar Andrade
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8M6GVG
• topic: Bioquímica; Bioquímica; Fígado Regeneracão; Cálcio intracelular; Células hepáticas

A regeneração do fígado depende de fatores de crescimento como o fator de crescimento hepático (HGF) e a insulina, que induzem sinais de Ca2+ necessários para a proliferação celular. Sinais de Ca2+ em hepatócitos dependem da atividade dos receptores de inositol 1,4,5-trifosfato (InsP3Rs), porém os mecanismos pelos quais ossinais de Ca2+ regulam a regeneração hepática não são conhecidos. Neste trabalho examinamos se o Ca2+ nuclear modula a expressão de genes envolvidos na proliferação celular e avaliamos também a contribuição dos sinais de Ca2+ mediados pelo InsP3RI naregulação da regeneração hepática. Para investigar alterações de expressão gênica pelo Ca2+ nuclear utilizamos o protocolo de RaSH (Rapid Subtraction Hybridization) que permite selecionar genes expressos em células SKHep1 que tiveram o Ca2+ nucleartamponado. A subtração permitiu identificar 154 genes cuja expressão foi afetada por pequena alteração na concentração do Ca2+ nuclear. Dentre estes, foram selecionados 3 clones, legumaína (LGMN), reticulom (RTN4) e o regulador do fator de crescimentotransformante (TBRG), que através de pesquisa de similaridade utilizando o programa BLASTN, mostraram envolvimento em processos de proliferação celular. A LGMN foi alvo de futuros estudos. Observamos que o tamponamento do Ca2+ nuclear reduziu os níveis de mRNA e os níveis protéicos da LGMN. Por outro lado, o aumento de Ca2+nuclear, pela estimulação das células SKHep1 com HGF aumentou a expressão de LGMN. O silenciamento da LGMN por siRNA diminuiu a proliferação de células SKHep1, por um mecanismo que independe da atividade da LGMN como endopeptidase. Além disso, foi observado que na ausência da LGMN, houve redução do índice mitótico, com significante redução na fração de células na fase G2/M. Isto foiassociado ao aumento na expressão das ciclinas A e E e ausência de apoptose. O papel da LGMN na proliferação celular foi confirmado em tecido humano, no qual observamos expressão aumentada de LGMN em células de hepatocarcinomas comparados a hepatócitos normais na mesma amostra. Como o aumento de Ca2+ intracelular em células hepáticas é mediado primordialmente por InsP3R, investigamos acontribuição relativa da isoforma tipo I do InsP3R na capacidade proliferativa de hepatócitos durante a regeneração hepática. Utilizamos siRNA acoplados ao sistema adenoviral para promover a redução na expressão InsP3R tanto in vitro quanto in vivo. Os adenovirus AdsiRNA-I foram eficientes e específicos para reduzir a expressão do receptor tanto em células CHO quanto em hepatócitos. A sinalização de Ca2+ foixiv deficiente em animais com InsP3RI silenciado e isto comprometeu o processo de regeneração do fígado. Em conjunto, esses dados mostram que o Ca2+ nuclear, regula o processo de proliferação de células hepáticas, ao menos em parte pela modulação do gene da LGMN. Além disso, demonstramos que a sinalização de Ca2+ mediada por InsP3RI é importante para regulação da regeneração do fígado.