Caracterização imuno-histoquímica e molecular de equídeos naturalmente infectados pelo vírus da anemia infecciosa equina

• Autor(a) principal: Bruna Lopes Bueno
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/40811
• topic: Anemia Infecciosa Equina; EIAV; Tecido; Tropismo; Patogenia; Imunohistoquímica

A anemia infecciosa equina (AIE), doença causada pelo vírus da anemia infecciosa equina (Equine infectious anemia vírus - EIAV), é considerada um obstáculo para o desenvolvimento da equideocultura. O EIAV é transmitido por insetos hematófagos, principalmente da família Tabanidae e também pela forma iatrogênica. A AIE não tem tratamento, nem vacina e a patogênese, assim como a resposta imune do hospedeiro contra o vírus não são totalmente compreendidas. Além disso, o desempenho do diagnóstico laboratorial por testes sorológicos é questionado. Nesse sentido, o método imunohistoquímico tem sido utilizado para aumentar o conhecimento sobre o tropismo e a patogenicidade de vários agentes infecciosos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um ensaio imunohistoquímico para detecção de antígenos virais em tecidos e órgãos de equídeos naturalmente infectados pelo EIAV. Fragmentos de órgãos de equídeos (n = 6) de Apodi - RN, Brasil, diagnosticados como positivos para AIE em testes sorológicos foram fixados em formalina tamponada a 10% e embebidos em parafina histológica. Cortes histológicos foram aderidos em lâminas de vidro polarizadas e a antigenicidade recuperada pelo calor, utilizando tampão citrato (pH = 6). Estas secções foram incubadas com anticorpo policlonal anti-EIAV overnight e, mais tarde, com anticorpo secundário anti-IgG equino conjugado com peroxidase (Sigma - Aldrich) durante 50 minutos. A reação antigeno/anticorpo foi revelada com o kit ImmPACTTM DAB Peroxidase Substrate (Vector Laboratories), contrastado com hematoxilina de Mayer (Sigma-Aldrich). Antígenos do EIAV foram observados na região intracitoplasmática do baço, fígado, rins e células pulmonares. Marcações imuno-histoquímicas estavam presentes principalmente na polpa vermelha do baço, uma região com abundância de macrófagos, e nos sinusóides hepáticos, onde as células de Kupffer (macrófagos hepáticos) se encontram. As imunomarcações também estavam presentes no epitélio bronquiolar e no septo alveolar, assim como no epitélio dos túbulos distal e proximal dos rins. A maior quantidade de EIAV foi observada no baço e no fígado, locais normalmente repletos de macrófagos, confirmando o tropismo viral pelos fagócitos mononucleares. No entanto, a presença de EIAV em células epiteliais do pulmão e rim indica que o vírus também pode infectar outros tipos de células além dos macrófagos, possibilitando a eliminação do mesmo na urina e nas secreções oronasais, propiciando novos mecanismos de transmissão que devem ser investigados.