Inovações metodológicas em hematologia clínica: uso da citometria de fluxo no estudo da ativação plaquetária na pré-eclâmpsia

• Autor(a) principal: Leticia Goncalves Freitas
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/FARC-8SMJ9Z
• topic: Pré-eclâmpsia; Agregado plaqueta-neutrófilo; Agregado plaqueta-monócito; CD61; CD41a; CD62P; CD42a; Gravidez Complicações e sequelas; Pré-eclampsia; Hematologia; Citometria de fluxo; Farmácia

A pré-eclâmpsia (PE) é uma complicação grave da gestação associada à elevada morbidade e mortalidade materno-fetal, cuja etiologia ainda não foi estabelecida. Na forma pura, caracteriza-se pelo aparecimento, em gestante normotensa, após a 20ª semana de gestação, de hipertensão e proteinúria. As alterações hemostáticas e inflamatórias associadas à gestação normal estão mais exacerbadas na PE. Estudos sugerem acentuada ativação e agregação plaquetária que contribuem para o estado de hipercoagulabilidade nessa doença. A citometria de fluxo tem sido amplamente utilizada para avaliar a expressão de glicoproteínas da superfície plaquetária, bem como a formação de agregados plaquetas-leucócitos e a expressão de fator tissular (FT) pelos monócitos. O objetivo deste estudo foi padronizar as técnicas para avaliar a expressão de marcadores de ativação plaquetária e expressão de FT e aplicá-las no estudo da PE. Foram avaliadas 97 mulheres, das quais 35 eram gestantes com PE (15 com a forma grave-PEG e 20 com a forma leve-PEL), 31 gestantes normotensas (GN) e 31 mulheres não gestantes (CNG). Foram avaliadas as intensidades médias de fluorescência (IMF) dos biomarcadores CD41a, CD61, CD42a, CD62P e a razão entre elas, bem como a percentagem de plaquetas CD62P+, de agregados plaquetas-monócitos (APM), de agregados plaquetas-neutrófilos (APN) e monócitos FT+. A IMF do CD62P e a percentagem de plaquetas CD62P+, nos três grupos não diferiu (p=0,67 e p=0,38, respectivamente). Após a subdivisão do grupo de gestantes com PE também não foi obtida diferença (p=0,69 para IMF do CD62P e p=0,54 para plaquetas CD62P+). A IMF do CD41a, nas gestantes com PE foi menor do que no CNG (p=0,004) e GN em relação ao CNG (p=0,007). A IMF do CD61 no grupo PEG foi menor do que no CNG (p=0,008). As IMF do CD61 e CD41a no grupo PE foram menores do que no CNG, e nas GN em relação ao CNG (p=0,00 para ambos). Ambas foram inferiores no PEG e PEL em relação ao CNG (p=0,00 para ambos). A IMF do CD42a, mesmo após a subdivisão do grupo PE, não diferiu (p=0,44 e p=0,57, respectivamente). As razões entre as IMF CD61/CD42a e CD41a/CD62P foram menores nas GN do que no CNG (p=0,002 e p=0,007, respectivamente) e no grupo de PE e PEG em relação ao CNG (p=0,001 para ambos). A razão IMF CD42a/CD41a foi superior no grupo PE e PEG em relação ao CNG (p=0,001 para ambos) e no GN em relação ao CNG (p=0,002). As razões de IMF do CD61/CD41a, CD61/CD62P e CD42a/CD62P, antes (p=0,29; p=0,07 e p=0,73, respectivamente) e após (p=0,42; p=0,14 e p=0,69, respectivamente) a subdivisão do grupo PE, não diferiu. A percentagem de APM antes (p=0,08) e após a subdivisão do grupo PE (p=0,13) não diferiu. A percentagem de APN foi menor na PE em relação ao CNG (p=0,01). Não houve diferença na formação de APN nas gestantes com PE comparadas às GN (p=0,40) e entre GN e CNG (p=0,018). Não houve diferença entre os grupos após a subdivisão do grupo PE (p=0,02). A percentagem de monócitos FT+ não diferiu entre os grupos antes (p=0,14) e após a subdivisão do grupo PE (p=0,26). O estudo possibilitou o desenvolvimento de inovações metodológicas em Hematologia Clínica para avaliar a ativação plaquetária. A padronização da técnica por citometria de fluxo para avaliar a ativação plaquetária e formação de APM e APN foi estabelecida. A gestação é acompanhada por alterações na expressão de CD41a e CD61 na superfície plaquetária, além da redução na contagem de plaquetas. A PE é acompanhada de menor percentagem de APN em relação ao CNG. A PEG está associada a um maior número de correlações entre os biomarcadores de ativação plaquetária sugerindo que o processo é multifatorial.