Padronização das técnicas de transplante de espermatogônias em Zebrafish (Danio rerio) e utilização desta espécie como modelo experimental para se investigar a biologia das espermatogônias tronco em teleósteos

• Autor(a) principal: Rafael Henrique Nobrega
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8NGMC8
• topic: Transplante de espermatogônias tronco; Peixes teleósteos; Espermatogênese; Zebrafish; Espermatogônias-tronco; Espermatogenese em animais; Espermatogônias; Biologia celular; Danio zebra; Peixe; Teleosteos Morfologia; Células tronco Transplante

A espermatogênese é um complexo processo de desenvolvimento celular no qual um pequeno número de espermatogônias tronco (SPGTs) origina um grande número de espermatozóides, os quais, como vetores gênicos, são capazes de propagar as o genoma da espécie. Este processo ocorre continuamente durante toda a vida reprodutiva do animal, devido ao potencial destas células de se auto-renovarem para manter seu número, ou de se diferenciarem em células-filhas que originarão espermatozóides. O balanço adequado entre estes dois processos é fundamental para a homeostase da espermatogênese, e sua regulação ocorre em locais específicos dos túbulos seminíferos denominados nichos espermatogoniais. Uma vez que a biologia da SPGT é desconhecida para um grande número de espécies, o presente estudo teve como objetivo inicial caracterizar, tanto do ponto de vista morfológico quanto funcional, as SPGTs em zebrafish (Danio rerio), o nicho espermatogonial, e por fim padronizar as técnicas de transplante de SPGTs para esta espécie. Duas populações de espermatogônias isoladas (Aund* e Aund) foram identificadas morfologicamente como potenciais candidatos a células tronco. Utilizando zebrafish vasa::egfp e a capacidade das células tronco em reter BrdU (5- bromo-2'-deoxiuridina) por longo período de tempo, observamos que o nicho espermatogonial se localiza próximo ou adjacente ao compartimento intersticial, sugerindo que a regulação deste nicho em zebrafish depende, pelo menos em parte, de hormônios e fatores parácrinos provenientes das células do compartimento intertubular. Através das técnicas de transplante de espermatogônias, as quais foram padronizadas com sucesso no presente estudo para o zebrafish, demonstramos que a fração celular enriquecida de Aund* e Aund foi capaz de colonizar os túbulos seminíferos, cuja espermatogênese endógena foi depletada com busulfan, e originar cistos de espermatogônias do tipo B e espermatócitos, 3 semanas pós-transplante. Além disso, quando transplantadas em fêmeas, estas espermatogônias foram capazes de se diferenciarem em oócitos. Desta forma, comprovamos o potencial tronco e a plasticidade destas espermatogônias. Os perfis hormonais e de expressão gênica dos testículos depletados antes do transplante sugerem que os elevados níveis de andrógenos, associados à baixa expressão do amh e elevada do igf3 (igf1b), podem ter contribuído para a criação de microambiente no nicho do animal receptor que propicia a diferenciação, ao invés de colonização/auto-renovação. Esta condição de pró-diferenciação pode ter interferido no comportamento das SPGTs transplantadas. Em síntese, o presente estudo mostra que o zebrafish representa um interessante modelo experimental para se estudar a biologia da SPGT em peixes.