Fucoidan protege contra a disfunção endotelial e aterosclerose em camundongos apoe-/- através da redução da inflamação e estresse oxidativo

• Autor(a) principal: Weslley Fernandes Braga
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/55347; https://orcid.org/0000-0001-8349-7099
• topic: Polissacarídeos sulfatados; Nutracêuticos; Antiaterogênico; Doença cardiovascular; Biquímica e imunologia; Doença cardiovasculares; Aterosclerose; Polissacarídeos; Suplementos nutricionais

Introdução: A aterosclerose é caracterizada por estresse oxidativo crônico e alterações inflamatórias no tecido vascular. As lesões endoteliais causadas pela lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDLox) desempenham um papel fundamental na gênese dessa doença. Estudos anteriores mostraram que o fucoidan, um polissacarídeo sulfatado extraído de algas marinhas, está associado a efeitos benéficos na prevenção da aterosclerose. Entretanto, o papel do fucoidan na regulação da função endotelial vascular e nos mecanismos associados ao efeito antiaterogênico ainda não está bem compreendido. Objetivo: Investigar o efeito do fucoidan no desenvolvimento da aterosclerose, avaliando os mecanismos moleculares envolvidos na proteção contra inflamação e estresse oxidativo endotelial. Métodos: Para testar o efeito anti-ateroscleróticos do fucoidan, camundongos com oito a dez semanas de idade, deficientes em apolipoproteína E (ApoE-/-) foram alimentados durante dez semanas com uma dieta rica em colesterol (DHC) ou dieta padrão (DP), com ou sem 1% de fucoidan. Ao final deste período, amostras de sangue foram coletadas para análise bioquímica e as aortas foram removidas para quantificação de lesões ateroscleróticas (coloração en face com Sudan IV). Nós também avaliamos a absorção e a distribuição tecidual do fucoidan, bem como interação leucócito-endotélio na veia mesentérica (por microscopia intravital), após uma administração oral de dose única de fucoidan. Para investigar o efeito do fucoidan na disfunção endotelial induzida pela LDLox, anéis da aorta torácica de camundongos e células endoteliais humanas (EA.hy926) foram pré-incubados com fucoidan (1, 5 ou 10 μg / mL), por 30 minutos, seguida de co-incubação com LDLox (50 μg / mL) por 4 horas. Após a incubação, os anéis aórticos foram utilizados para realização de estudos de reatividade vascular. As células endoteliais foram utilizadas para ensaio de viabilidade celular e adesão de monócitos, bem como para analisar a produção de citocinas, expressão de moléculas de adesão e geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). Além disso, a correlação entre o fucoidan e a via de sinalização EROs/NF-κB foi explorada. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê de Ética e Uso de Animais da Universidade Federal de Minas Gerais, conforme o Protocolo nº 284/2016. Análise estatística: One-way ANOVA seguido de pós-teste de Tukey foi realizado para comparar grupos, usando o software GraphPad Prism 7. Todos os dados foram apresentados como média ± SD. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas com p<0,05. Resultados: O tratamento com fucoidan reduziu significativamente a área de lesão na aorta de camundongos ApoE-/- alimentados com dieta rica em colesterol (DHC 7,61 ± 1,48 vs DHC + Fuc 1% 4,39 ± 1,95), sem alterações entre os grupos DP. Esse resultado foi associado à diminuição dos níveis séricos de colesterol total (22%), triglicérides (35%) e frações do colesterol não-HDL (21%). Observamos que a LDLox reduziu o relaxamento induzido pela acetilcolina (ACh) na aorta, mas o tratamento com fucoidan reverteu essa disfunção. Em estudos in vitro, o pré-tratamento com fucoidan reduziu as respostas inflamatórias, reduzindo a adesão de monócitos à camada de células endoteliais pré-tratadas com LDLox (> 50%), bem como reduzindo a produção de mediadores pró-inflamatórios (MCP-1, IL-6 e TNF) e a expressão de moléculas de adesão (P-Selectina e VCAM). Além disso, o fucoidan atenuou a geração de EROs e reduziu a ativação da via de sinalização do NF-κB (diminuindo a fosforilação da subunidade p65). Conclusões: Nosso estudo demonstrou que o fucoidan reduziu a aterosclerose em camundongos ApoE-/-, e os mecanismos ateroprotetores estão associados à redução da inflamação e estresse oxidativo. Assim, o fucoidan possui propriedades vasoprotetoras, sugerindo possíveis efeitos terapêuticos contra as doenças cardiovasculares.