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Andre Ricardo MassensiniFabiola Mara RibeiroThiago Verano BragaGabriela Maria de Abreu Gomes2019-08-13T05:38:47Z2019-08-13T05:38:47Z2016-08-05http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ADZM8CO acidente vascular cerebral (AVC) é caracterizado por uma diminuição do fluxo sanguíneo, levando a uma completa falta (anoxia) ou a baixos níveis de oxigênio (hipoxia), juntamente com a ausência ou reduzidos níveis de glicose; e esse evento por si só (isquemia) é um evento que causa danos. A isquemia cerebral resulta em uma cascata de eventos metabólicos deletérios, que causam importantes alterações celulares, como rápida diminuição de ATP, perda da integridade da membrana, liberação de Ca2+ dos estoques intracelulares, aumento da permeabilidade ao Ca2+, perda da homeostase iônica, excitotoxicidade, ativação de enzimas e disfunção mitocondrial.. A perda da homeostase iônica durante o processo isquêmico leva a uma liberação excessiva de glutamato, causando a excitotoxicidade glutamatérgica, e por fim a morte neuronal. A expressão do receptor glutamatérgico AMPA é alterada pelo processo isquêmico. Em condições fisiológicas, o receptor AMPA contém a subunidade GluR2, que torna o canal impermeável a íons divalentes, como Ca2+ e Zn2+. Durante o processo isquêmico, ocorre a internalização e subsequente degradação da GluR2, aumentando a permeabilidade do canal ao Ca2+. Apesar de ter sido descoberto há mais de 100 anos atrás, o sistema renina angiotensina ainda apresenta um papel chave para o tratamento de várias doenças cardiovasculares. Todos os componentes do eixo ECA2/Ang-(1-7)/Mas são expressos no tecido cerebral e desempenham um papel crucial na neuroproteção em casos de isquemia. Vários estudos sugerem que a administração Ang-(1-7) reduz a área de infarto e produz proteção cerebral em modelos de AVC em roedores, porém os mecanismos pelos quais a Ang-(1-7) promove neuroproteção ainda não estão completamente elucidados. O objetivo deste trabalho foi investigar se Ang-(1-7) promove neuroproteção através da modulação de receptores glutamatérgicos do tipo AMPA. Para desenvolver este trabalho, fatias hipocampais de camundongos foram dividas em grupos testes e controles, com Ang-(1-7) e/ou o antagonista do receptor Mas (A-779), e submetidas à privação de oxigênio e glicose. Posteriormente foram analisadas a viabilidade celular, quantidade total e membranar das subunidades GluR2 e GluR1 do receptor AMPA, e liberação de glutamato. Nossos resultados mostraram que Ang-(1-7) foi capaz diminuir a morte celular de fatias hipocampais submetidas à isquemia in-vitro. Como possível mecanismo protetor, verificamos que o tratamento com Ang-(1-7) preveniu a internalização e degradação da subunidade GluR2 do receptor AMPA. Além disso, nosso trabalho também mostrou que o tratamento com Ang-(1-7) reduziu a liberação de glutamato e reduziu a morte celular estimulada por agonista AMPA. Concluimos que o tratamento com Ang-(1-7) foi capaz de proteger fatias hipocampais submetidas ao protocolo de OGD, prevenindo a internalização e degradação da subunidade GluR2 do receptor AMPA e, consequentemente, a excitotoxicidade glutamatérgica induzida pelo agonista AMPA.Stroke is caused by a decrease in blood flow, which leads to a complete absence of oxygen (anoxia) and low oxygen (hypoxia) together with the absence or low glucose delivery and this event by itself is an event that causes damage (ischemia). Cerebral ischemia results in a cascade of metabolic events that cause important deleterious cellular changes. After ischemic insult neurons may die immediately after injury or until 10 days later. This is due to metabolic alterations, such as rapid decrease of ATP, loss of membrane integrity, release of Ca2+ from intracellular stores, increased Ca2+ permeability, loss of ionic homeostasis, excitotoxicity, enzyme activation and mitochondrial dysfunction. The loss of ion homeostasis during ischemic process leads to excessive glutamate release, causing glutamatergic excitotoxicity, and finally neuronal death. Expression of glutamatergic AMPA receptor is modified by ischemic process. Under physiological conditions there are AMPARs GluR2-containing, which makes the channel impermeable to divalent ions such as Ca2 + and Zn2 +.During the ischemic process occurs internalization and subsequent degradation of GluR2, increasing the channel permeability to Ca2+.Although it was discovered more than 100 years ago, the renin angiotensin system further has a key role in treating various cardiovascular diseases. All components shaft ACE2 / Ang- (1-7) / ACE are expressed in brain tissue and play a crucial role in neuroprotection in cases of ischemia. Several studies suggest that the administration Ang-(1-7) reduces infarct area and produces brain protection in stroke models in rodents, but the mechanisms by which Ang- (1-7) promotes neuroprotection are not yet fully elucidated. The aim of this study was to investigate whether Ang- (1-7) promotes neuroprotection by modulating AMPA glutamate receptors .In order to develop this work, hippocampal slices were subjected to OGD protocol, divided into groups tests and controls with Ang- (1-7) and receptor antagonist Mas ,A-779, to evaluate cell viability, AMPA receptor subunit expression, GluR2 and GluR1 total and membrane expression and also glutamate released. Our results show that Ang- (1-7) was able to reduce cell death in hippocampal slices subjected to in vitro ischemia. As a possible protective mechanism, we found that treatment with Ang- (1-7) prevented the internalization and degradation of the GluR2 subunit of the AMPA receptor. In addition, our work also showed that treatment with Ang- (1-7) reduced glutamate release and reduced cell death stimulated by AMPA agonist.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGFarmacologiaFisiologiaNeuroproteçãoAMPAIsquemiaAng-(1-7)GluR2OGDAng-(1-7) protege fatias de hipocampo do cérebro de camundongos contra o dano isquêmico modulando o tráfego de receptores de glutamato do tipo AMPAinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o___gabriela_maria_de_abeu_gomes_2016.pdfapplication/pdf2613003https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-ADZM8C/1/disserta__o___gabriela_maria_de_abeu_gomes_2016.pdf497ce378634b12c3ee9bd36ec53bfa69MD51TEXTdisserta__o___gabriela_maria_de_abeu_gomes_2016.pdf.txtdisserta__o___gabriela_maria_de_abeu_gomes_2016.pdf.txtExtracted texttext/plain164051https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-ADZM8C/2/disserta__o___gabriela_maria_de_abeu_gomes_2016.pdf.txtdadae13d374210976851225336467eddMD521843/BUBD-ADZM8C2019-11-14 21:22:48.84oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-ADZM8CRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-15T00:22:48Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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