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Erna Geessien KroonGabriel Magno de Freitas AlmeidaJonatas Santos AbrahaoDanilo Bretas de Oliveira2019-08-11T13:18:30Z2019-08-11T13:18:30Z2015-01-30http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ABZGBWInfecções no sistema nervoso central (SNC) apresentam distribuição global, acometendo populações em todas as partes do globo. Infecções virais são as principais causas de infecção no SNC em todo o mundo. No Brasil, em média, são notificados 11.500 casos/ano de meningite/meningoencefalite com provável etiologia viral. Entretanto, para a maioria dos casos não há identificação do agente etiológico. Assim, o objetivo deste trabalho foi a utilização da PCR em tempo real (qPCR) para desenvolvimento e avaliação de uma plataforma de diagnóstico para meningoencefalites causadas por vírus. Para isso, foram utilizadas amostras de agentes virais causadores de meningite para obtenção de plasmídeos controle e para padronização da PCR. Foram desenhados iniciadores específicos para detecção de cada vírus separadamente ou grupos virais. Todas as reações desenvolvidas foram padronizadas e apresentaram eficiência satisfatória: ENTV 110%; FLAV 92%%; HHV-1/2 114%%; HHV-3 113%%; SLEV 94%; YFV 96%; JEV 97%; WNV 98%. Todos os testes foram específicos na detecção do alvo e sensíveis, com sensibilidade analítica inferior ou igual a 10 cópias/mL. Os ensaios desenvolvidos apresentaram coeficiente de variação inferior a 5% em testes de reprodutibilidade e de repetibilidade. Além dos ensaios baseados em qPCR foram padronizadas etapas pré-analíticas para aumentar a eficiência de detecção viral. A plataforma de diagnóstico foi avaliada em amostras clínicas de líquido cefalorraquidiano (LCR), sendo capaz de detectar vírus em 62,9% das amostras de pacientes com suspeita de meningoencefalite viral. Foram detectados ENTVs (70%), HHV-3 (13%), DENVs (11%), HSV-1/2 e HHV-5 (2%). O DNA amplificado de amostras de LCR positivas foi sequenciado e os resultados da plataforma qPCR foram confirmados. Também foram detectados vírus em amostras de pacientes com diagnóstico de meningite bacteriana. A plataforma desenvolvida foi eficiente para o diagnóstico de infecções no SNC e apresenta potencial de aplicação no sistema de saúde.Infections on central nervous system (CNS) have a global distribution, affecting people worldwide. Viral infections are the main cause of infection in the CNS. In Brazil, on average, 11,500 cases/year of meningitis/meningoencephalitis with probable viral etiology are reported. However, most cases there are no identification of the etiologic agent. The objective of this work was the use of real time PCR (qPCR) for development and evaluation of a platform of diagnostic for meningoencephalitis caused by viruses. Viruses were used to obtain plasmids for control and standardization of qPCR. Specific primers were designed to detect each virus or viral groups. All reactions were standardized and presented efficiency of: ENTV 110%; FLAV 92%; HHV-1/2 114%; HHV-3 113%; SLEV 94%; YFV 96%; 97% JEV; 98% WNV. All tests were specific in the target detection and analytical sensitivities were equal or less to 10 copies/ml. The developed tests showed coefficient of variation less than 5% in reproducibility and repeatability assays. In addition to qPCR assays pre-analytical steps were standardized to improve viral detection efficiency. Finally, the qPCR platform was applied on clinical samples of cerebrospinal liquid (CSF), and it was able to detect the virus in 62.9% of samples from patients with suspected viral meningoencephalitis. ENTVs were detected (70%), HHV-3 (13%), DENVs (11%), HSV-1/2 and HHV-5 (2%). The amplified DNAs in qPCR positive samples were sequenced and the results were confirmed. Viruses were also detected in samples of patients with bacterial meningitis. So the developed platform showed high efficiency for diagnosis of infections in CNS and has a potential use in health system.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGMicrobiologiaReação em cadeia da polimerase em tempo realMeningoencefaliteSistema nervoso centralVirosesMicrobiologiaDesenvolvimento e avaliação de uma plataforma de diagnóstico para meningoencefalites virais por PCR em tempo realinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese___danilo_bretas_de_oliveira.pdfapplication/pdf7693858https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-ABZGBW/1/tese___danilo_bretas_de_oliveira.pdf1fc7bbd0387989e1cb980fcdd91c0e6aMD51TEXTtese___danilo_bretas_de_oliveira.pdf.txttese___danilo_bretas_de_oliveira.pdf.txtExtracted texttext/plain242211https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-ABZGBW/2/tese___danilo_bretas_de_oliveira.pdf.txtf665ff6c0864aa9403b41d1a02976d34MD521843/BUBD-ABZGBW2019-11-14 10:21:46.021oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-ABZGBWRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T13:21:46Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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