Identificação de espermátides em testículo humano pelo método de sonicação para aplicação em reprodução assistida

• Autor(a) principal: Lilian Massara Martinelli
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/65654
• topic: Azoospermia; Espermátides; Testículos; Biologia Celular; Azoospermia; Espermátides; Testículos

Azoospermia é uma condição de infertilidade caracterizada pela ausência de espermatozoides no ejaculado. Em muitos casos, a paternidade só pode ser alcançada com o auxílio da reprodução assistida, isto é, com a extração de espermatozoides de fragmentos testiculares e posterior injeção intracitoplasmática dos mesmos (ICSI), processo conhecido como fertilização in vitro. Para extração dos espermatozoides têmse utilizado métodos de busca sob microscópio de luz, através de fragmentação mecânica manual, muitas vezes sem sucesso. No entanto, não se sabe se o fato de não ter encontrado espermatozoides é por ausência dos mesmos no testículo ou por falha no método de busca. O presente estudo avaliou a eficácia do método de sonicação de fragmentos testiculares, que emprega dissociação do tecido testicular e degeneração de células, com exceção das cabeças de espermátides alongadas, visando determinar com mais acurácia a presença desse tipo celular nos testículos de pacientes com azoospermia. A análise histopatológica dos testículos mostrou que em todos os pacientes, os testículos apresentavam características semelhantes, típicas de hipoespermatogênese (escore de Johnsen ~ 8). A preservação das cabeças de espermátides após sonicação, em diferentes combinações de frequência e tempo, foi verificada pelo método de concentração, por Cytospin, do homogeneizado em lâmina, seguido de coloração com kit Panótico. A combinação de 60Hz por 90s de sonicação mostrou ser a melhor para manter íntegras as cabeças de espermátides e eliminar demais tipos celulares. Quando se realizou a predição da produção espermática a partir da contagem de cabeças de espermátides obtidas por sonicação, verificou-se que não houve diferença entre as diferentes combinações de frequência e tempo testadas, independente da microscopia utilizada para a contagem, fluorescência ou contraste de fase. Dessa forma, todas as combinações poderiam ser aplicadas, no entanto, levando-se em conta a maior preservação de espermátides íntegras isoladas, atestada pelo método do Cytospin, sugere-se a combinação 60Hz/90s para a predição da produção espermática.