Efeitos da Angiotensina-(1-7) e Alamandina na polarização in vitro de macrófagos murínicos para os fenótipos M1 E M2A

• Autor(a) principal: Melissa de Carvalho Santuchi
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/59802
• topic: Macrófagos; Caracterização fenotípica; Fenótipos M1 e M2a; Citocinas; Sistema renina-angiotensina; Angiotensina-(1-7); Alamandina; Receptor Mas; MrgD; Fisiologia; Macrófagos; Citocinas; Sistema Renina-Angiotensina

Introdução: Macrófagos ativados aos fenótipos M1 e M2a são considerados importantes efetores em diversas condições fisiopatológicas como inflamação e doenças cardiovasculares. A angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] diminui a resposta inflamatória de alguns genes em M1, mas não é sabido seu efeito sobre outras citocinas e sobre o fenótipo M2a. Não existem relatos do efeito da alamandina, componente recémcaracterizado do sistema renina-angiotensina, na polarização de macrófagos. Objetivo: Avaliar o efeito da Ang-(1-7) e alamandina no perfil fenotípico de macrófagos M1 e M2a de macrófagos derivados da medula óssea de camundongos FVB/N in vitro. Métodos: Células da medula óssea obtidas de fêmures e tíbias de camundongos machos FVB/N WT adultos foram cultivadas por 8 dias. Foi feita a polarização in vitro a M1 (IFN-γ e LPS) e M2 (IL-4) por 4 horas, seguida de tratamento com veículo, Ang-(1-7) ou alamandina, ambas a 10-7M, em cada um dos grupos. A caracterização de M1 e M2a foi feita pela marcação de F-actina e pela expressão de dos transcritos de Arg-2, CCL2, IL-1β, IL-10, iNOS e TNFα (M1); e Arg1, CD206, FIZZ-1, IL-10 e YM-1(M2a) por qPCR. Foram analisados o conteúdo de TNFα (ELISA) e NO2- (método de Griess); e a produção de EROs por DHE. Foi avaliada também a expressão e localização dos receptores Mas e MrgD em ambos os fenótipos por qPCR e imunofluorescência. Os efeitos dos peptídeos foram avaliados por qPCR e a participação dos receptores Mas e MrgD nestes foi analisada pelo antagonismo farmacológico por A779 e D-Pro. Resultados: Não foram observadas diferenças morfológicas entre os fenótipos M1 e M2a. Os tratamentos com Ang-(1-7) e alamandina diminuíram a expressão dos genes para M1 (TNFα, IL-1β e CCL2). Em M2a, a expressão de FIZZ-1 não foi alterada, mas se observou aumento da expressão do transcrito para YM-1 com o tratamento com os dois peptídeos. A alamandina ainda reduziu a expressão do transcrito de CD206. O antagonismo farmacológico dos receptores com A779 e D-Pro revelou que os efeitos observados em M1 são dependentes dos receptores Mas e MrgD, respectivamente, exceto para IL-1β. Em M2a, o efeito observado não parece depender desses receptores. Conclusão: Com marcadores previamente descritos na literatura, M1 e M2a foram caracterizados e demonstrou-se que ambas Ang-(1-7) e alamandina afetam distintamente a polarização dessas células, diminuindo a expressão de um conjunto de genes pró-inflamatórios e agindo em um espectro menor nos genes anti-inflamatórios. Este é o primeiro relato da presença do receptor MrgD em macrófagos murínicos e do efeito anti-inflamatório da ativação da via alamandina/MrgD. Apoio financeiro: CAPES, CNPq, FAPEMIG e INCT Nanobiofar.