Estudo da inter-relação das vias autofágicas e apoptóticas durante a espermatogênese e regressão ovariana da tilápia do Nilo Oreochromis niloticus em condições de cultivo

• Autor(a) principal: Camila Ferreira Sales
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/43365
• topic: Testosterona; Células Germinativas; Marcadores Autofágicos; Teleósteos; Restrição Alimentar; Biologia celular; Apoptose; Autofagia; Atresia Folicular; Ciclídeos; Espermatogênese; Jejum

Apoptose e autofagia são vias de sinalização altamente conservadas e são essenciais em diversos processos fisiológicos. Apesar dos avanços recentes, ainda há muitas lacunas no conhecimento das suas interações, especialmente em vertebrados não mamíferos. Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi investigar a interação das vias autofágica e apoptótica na atresia folicular e na espermatogênese de tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus, em condições de cultivo. Para isso, o projeto foi desenvolvido em três etapas. Na primeira etapa, para investigar a interação das vias autofágica e apoptótica na atresia folicular, animais recém desovados foram mantidos em condição de cultivo e amostras de ovários foram coletadas para análises morfológicas, técnica de TUNEL e imunohistoquimica. A atresia folicular nos ovários de O. niloticus foi analisada em três estágios de regressão: folículos atrésicos iniciais (AFE), avançados (AFA) e tardios (AFL). Nos folículos atrésicos iniciais e avançados as células foliculares apresentaram grandes lisossomos e autofagossomos contendo mitocôndrias em degeneração, restos de organelas e grânulos elétron-densos. Além disso, foram observados aumentos significativos nas imunomarcações de Bcl-2, Catepsina-D, Beclin-1 e LC3. Nos folículos atrésicos tardios, as células foliculares apresentaram um citoplasma elétron-lúcido e apoptose aumentada com imunorreatividade para Bax e muitas células positivas para TUNEL. Além disso, a colocalização entre LC3 e Caspase-3 em AFL e LAMP-1 e Catepsina-D em AFE e AFA mostrou pontos de interação entre autofagia e apoptose durante atresia folicular de tilápia do Nilo. Na segunda e terceira etapa desse trabalho, nós avaliamos a atuação das vias autofágica e apoptótica durante a espermatogênese em animais submetidos ao sistema de realimentação e a restrição alimentar total por 7, 14, 21 e 28 dias. A análise dos efeitos do jejum sobre os parâmetros bioquímicos, hormonais e morfológicos mostrou que após 7 dias de jejum, os níveis glicêmicos e lipídicos foram significativamente reduzidos, seguidos pela redução plasmática de testosterona (T) e 11-ketotestosterona (11-KT). Além disso, foi observado a proliferação reduzida de espermatogônias e aumento da apoptose em espermatócitos, espermátides e espermatozoides. Nos grupos de realimentação, os esteroides sexuais e a proporção de células germinativas não apresentaram alterações significativas em relação ao grupo controle, exceto pela redução de espermatozoides. A atuação da via autofágica durante a espermatogênese foi evidenciada pela imunomarcação de LC3 e Beclin-1 e pela presença de estruturas autofágicas como autofagossomos, autolisossomos e corpos multilamelares em espermatócitos secundários, espermátides, células de Sertoli e de Leydig. A apoptose foi identificada principalmente em espermatócitos e espermátides, com aumento significativo após 21 e 28 dias de jejum. Em conjunto, nossos dados mostraram a atuação da autofagia na manutenção da viabilidade celular