Vírus da leucose enzoótica bovina: filogenia e regulação gênica de LTR e POL em amostras brasileiras

• Autor(a) principal: Christian Hirsch
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8C4ET6
• topic: Análise filogenética; BVL; Transcrição viral; LTR; Pol; Veterinária

Este trabalho apresenta os resultados da investigação de duas regiões do genoma do vírus BLV Bovine Leukemia Vírus, em amostras brasileiras. As amostras de DNA bovino, de animais infectados pelo BLV, pertencem ao banco de DNA do Retrolab/EV/UFMG, oriundas de quatro localidades diferentes no Brasil. Três PCRs foram desenvolvidas: uma foi projetada para amplificar o gene constitutivo da B-actina bovina e desenvolvida para acessar a qualidade dos DNAs. A segunda PCR foi utilizada na amplificação de um fragmento de 582pb dentro da região promotora da transcrição do BLV, 5LTR. A terceira PCR procurou amplificar um fragmento de 783pb da porção terminal do gene pol do BLV, correspondente a região codificadora da Integrase. Os resultados das amplificações, sua importância, seqüenciamento e análises filogenéticas são apresentados e discutidos. Ambas PCRs de amplificação de fragmentos do genoma do BLV atenderam ao objetivo básico de gerar produtos para o seqüenciamento. Foram obtidos vinte e dois seqüenciamentos da região 5LTR e dez seqüenciamentos da região pol. A análise filogenética destes genomas apontou para um elevado grau de concentração na região 5LTR, e permitiu a caracterização de cinco agrupamentos, embora não tenha sido possível associar estes agrupamentos com as regiões brasileiras de origem dos DNAs. Em relação ao país de origem dos vírus seqüenciados, esta árvore sugere a formação de um agrupamento Brasil Argentina, um agrupamento norte-americano (FLK), um agrupamento Japão Belgica Brasil, um agrupamento Brasil e um agrupamento Brasil Austrália. Foi executada uma análise de restrição enzimática in silico destes fragmentos, cujo resultado corrobora em parte os achados na árvore filogenética e sugere a formação de um macro-agrupamento sul-americano, aglutinado uma amostra Argentina e todas as amostras brasileiras, porém nenhuma amostra de outra parte do mundo. Além disto, a comparação das 22 amostras brasileiras indicou a presença de uma região mais variável em um segmento de 88pb, coincide com as DAS, seqüência ativadoras a jusante, descritas por Kiss-Toth e Unk em 1994. A interação deste achado com a atividade de transcrição viral e a patogenia é discutida. Para a região pol, uma árvore filogenética foi gerada com valores de bootstrap consistentes, entretanto o pequeno número de DNAs seqüenciados, assim como dos disponíveis no banco de dados genômicos mundial GenBank, para esta região, não permitiu a inferência de agrupamentos consistentes. Destacou-se nos seqüenciamentos de pol a existência de uma região mais variável na extremidade terminal, que levou a importantes alterações dos aminoácidos em algumas amostras.