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Thiago de Castro Gomeshttp://lattes.cnpq.br/8512310786312942Maria de Fátima Martins HortaDaniella Castanheira BartholomeuLuciana de Oliveira Andradehttp://lattes.cnpq.br/2169898850234838Thamires Queiroz de Oliveira2023-03-15T16:28:56Z2023-03-15T16:28:56Z2022-08-29http://hdl.handle.net/1843/50916https://orcid.org/0000-0003-0306-0159Os parasitos intracelulares são caracterizados pela necessidade de invadir e viver dentro das células hospedeiras. Para Leishmania spp. é geralmente assumido que o parasito deve ser capturado por células fagocitárias, notadamente os macrófagos. No entanto, vários estudos descreveram a presença de amastigotas de Leishmania spp. dentro de células não-fagocitárias. Uma vez que a invasão de células hospedeiras é um processo chave nas infecções por parasitos intracelulares, decidimos investigar os mecanismos que permitem às amastigotas de Leishmania amazonensis invadir células sem a capacidade de realizar fagocitose clássica. Aqui utilizamos diferentes técnicas de biologia celular para estudar o processo de invasão celular de células não-fagocitárias por amastigotas de L. amazonensis em fibroblastos embrionários de camundongos (MEF). Realizamos e quantificamos ensaios de infecção e marcamos células infectadas e parasitos para visualizar moléculas, organelas e estruturas possivelmente envolvidas na invasão celular e posteriormente, análises por diferentes técnicas de microscopia. Os nossos resultados mostram que as formas amastigotas vivas, mas não as amastigotas mortas (fixadas com paraformaldeído), são rapidamente internalizadas em MEFs, onde sobrevivem e persistem em vacúolos parasitóforos ricos em marcadores lisossômicos. Ao marcar as células hospedeiras com sondas para F-actina e utilizando inibidores da polimerização da actina, demonstramos que a invasão depende do citoesqueleto da célula hospedeira. Microscopias confocais de momentos iniciais da infecção indicam que o parasito é capaz de induzir uma re-organização extremamente localizada do citoesqueleto da célula hospedeira para induzir a invasão. Uma vez que demonstramos anteriormente que as promastigotas utilizam os lisossomos de células hospedeiras e não seu citoesqueleto para invadir fibroblastos, propomos agora que a invasão celular de células não fagocíticas por L. amazonensis é mecanisticamente diferente para cada forma infecciosa do parasito. A presença de amastigotas de Leishmania spp. dentro das células não-fagocitárias é um aspecto negligenciado da biologia destes parasitos. Estudos sobre estas novas vias de infecção e sobre o papel das células não-fagocitárias no decurso da infecção podem fornecer informações importantes sobre a biologia destes parasitos e sobre as doenças por eles causadas.Intracellular parasites are characterized by the need to invade and live within host cells. For Leishmania spp. it is commonly assumed that the parasite must be captured by phagocytic cells, notably macrophages. However, several studies have described the presence of Leishmania spp. amastigotes within non-phagocytic cells. Since cell entry is a key process in infections by intracellular parasites we decided to investigate the mechanisms that allow Leishmania amazonensis amastigotes to invade cells lacking the ability to perform classical phagocytosis. Here we used different cell biology techniques to study the cell invasion process of non-phagocytic cells by L. amazonensis amastigotes in mouse embryonic fibroblasts (MEF). We performed and quantified infections, labelled infected cells and parasites to visualize molecules, organelles and structures possibly involved in cell invasion and proceeded analysis by different microscopy techniques. Our results show that living, but not PFA-fixed amastigotes, are rapidly internalized in MEFs, where they survive and persist within parasitophorous vacuoles rich in lysosomal markers. By labeling host cells with F-actin probes and using inhibitors of actin polymerization we demonstrated that invasion is dependent on host cell cytoskeleton. Confocal microscopies of early moments of infection indicate that the parasite is able to induce an extremely localized re-arrangement of host cell cytoskeleton to induce invasion. Since we had previously demonstrated that promastigotes use host cell lysosomes and not F-actin to invade MEFs we now propose that cell invasion of nonphagocytic cells by L. amazonensis is mechanistically different for each of the two evolutive forms presented by the parasite. The presence of Leishmania spp. amastigotes within non-phagocytic cells is an overlooked aspect of their biology. Studies on these new infection routes and on the role of non-phagocytic cells in the course of infection may provide important information about the biology of these parasites and the diseases they cause.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em ParasitologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIAPrograma Institucional de Internacionalização – CAPES - PrInthttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessParasitologiaLeishmaniaLeishmanioseMacrófagosFibroblastosNeutrófilosLeishmania amazonensisAmastigotasInfecção de células não fagocíticas por amastigotas de Leishmania amazonensis: um estudo dos mecanismos celulares envolvidos na invasão da célula hospedeirainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/50916/5/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD55ORIGINALDissertação Thamires Q Oliveira Versão final Pós defesa versão para repertório UFMG.pdfDissertação Thamires Q Oliveira Versão final Pós defesa versão para repertório UFMG.pdfapplication/pdf3240203https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/50916/4/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20Thamires%20Q%20Oliveira%20Vers%c3%a3o%20final%20P%c3%b3s%20defesa%20vers%c3%a3o%20para%20repert%c3%b3rio%20UFMG.pdf939919554697b6afc81b53769c395a7dMD54CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/50916/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD521843/509162023-03-15 13:28:56.473oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2023-03-15T16:28:56Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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