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Anilton Cesar VasconcelosMaria Norma MeloMilene Alvarenga RachidJose Carlos NogueiraMarlene Isabel Vargas ViloriaMariana Machado NevesBarbara Laurice Araujo Vercosa2019-08-14T06:41:05Z2019-08-14T06:41:05Z2015-02-25http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9W9KKMA patogenia da leishmaniose visceral (LV) está associada com a expressão alterada de quimiocinas e a deficiente migração de células inflamatórias. A apoptose se associa com a resolução da inflamação. No entanto, em rins de cães infectados por L. infantum, a apoptose parece agir como um marcador de atividade inflamatória, e não como um evento de resolução, se contrapondo com o recrutamento inflamatório. A fibrose é evento frequente na inflamação crônica e na leishmaniose visceral canina está associada à evolução prolongada da doença. Objetivou-se aqui caracterizar e quantificar algumas moléculas relacionadas com a apoptose, inflamação e fibrose; e correlacionar estes achados com a sintomatologia clínica e com as lesões histopatológicas renais provocadas pela Leishmania infantum em cães naturalmente infectados. A leishmaniose foi confirmada por IFA e ELISA, imprints, cultura e PCR. Fragmentos de rim foram coletados e processados para exame histológico. Dezesseis animais infectados e sete controles foram usados. RNAm de citocinas e quimiocinas foram quantificados por qPCR. A morfometria das lesões foi realizada em 20 campos histológicos representativos. A inflamação e celularidade do infiltrado inflamatório foi maior em cães sintomáticos, intermediária em assintomáticos e menor em controles. A apoptose nas células glomerulares e tubulares foi maior em sintomáticos que nos controles. Nos infiltrados inflamatórios a apoptose foi maior em sintomáticos, intermediário em assintomáticos e menor nos controles. A fibrose intertubular foi mais intensa em infectados enquanto a fibrose perivascular foi maior nos sintomáticos, intermediaria nos assintomáticos, e menor nos controles. As expressões de MCP2, CCL4, Bax, Bcl2, caspase 9, Fas, IFN-, TNF-, IL-4, IL-10, IL-12, IL-13 e TGF- foram maiores em sintomáticos que em assintomáticos. Já as expressões de IL-4, Bax/Bcl2 e CCL4 foram maiores nos sintomáticos que nos assintomáticos. IL-6, IFN-/TGF- , IL-12/TGF- , 4 MCP-1, CCL5, Caspase 3, Caspase 8, Bax e Bcl-2 estavam superexpressas em ambos os grupos infectados. Já a IL-2 foi menos expressa em ambos os grupos infectados. Além disso, TNF-/TGF-foi maior em assintomáticos e menor em sintomáticos. Conclui-se que a inflamação renal na leishmaniose visceral não está associada com a infecção tecidual, que a IL-4 participa na regulação negativa da expressão de quimiocinas associadas com o recrutamento de linfócitos Th1 para tecidos inflamados e que IFN-, TNF-, IL -4, IL-12 e IL-10 podem ser utilizados como marcadores de inflamação renal na infecção sintomática. Além disso, a apoptose não é sempre e somente correlacionada com a resolução da inflamação, mas pode ocorrer na fase ativa da inflamação, como evidenciado neste estudo morfométrico e molecular concomitante. A fibrose renal atingiu os vasos e o estroma, e a via de fibrogênese foi dirigida por IL-13, que é TGF- dependente.Pathogenesis of Visceral Leishmaniasis (VL) is associated with altered chemokine expression and defective migration of immune cells. Apoptosis is usually associated with resolution of inflammation. However, in kidneys of L. infantum infected dogs, apoptosis seems to be balancing inflammatory recruitment and acting as a marker of inflammatory activity, not as a resolution event. Fibrosis is an expected event in chronic inflammation and canine visceral leishmaniasis is always associated with a long and chronic evolution. The aim of this work was to quantify some molecules related to apoptosis, inflammation and fibrosis; correlate these findings with the clinical symptoms and the presence of renal histopathological lesions in naturally infected dogs by Leishmania infantum. Diagnosis of leishmaniasis was confirmed by IFA and ELISA, imprints, culture and PCR. Fragments of kidney were collected and processed for histological examination. Sixteen dogs with visceral leishmaniasis and seven noninfected controls were used. mRNA of some cytokines and chemokines were measured by qPCR. Morphometry were evaluated in 20 representative histological fields. Symptomatic dogs showed more intense inflammation and higher cellularity of the inflammatory infiltrates than asymptomatic ones, which were higher than controls. Glomerular and tubular cells showed a higher apoptotic index in symptomatic animals as compared to controls. Apoptosis within the inflammatory infiltrates was highest in symptomatic dogs, intermediary in asymptomatic and smallest in controls. Asymptomatic dogs had only discrete and focal inflammation. More intense intertubular fibrosis occurred in infected dogs. Adventitial fibrosis were more intense in symptomatic dogs than in asymptomatic ones, which had higher measurements than control dogs. MCP2, CCL4, Bax, Bcl2, caspase 9, Fas, IFN-, TNF-, IL-4, IL-10, IL- 12, IL-13 e TGF- expressions were upregulated in symptomatic dogs and down 6 regulated in asymptomatic dogs when compared with non-infected controls. Furthermore, IL-4, Bax\Bcl2 and CCL4 was more expressed in symptomatic dogs as compared with asymptomatic animals. IL-6, IFN-/TGF- e IL-12/TGF- , MCP-1, CCL5, caspase 3, caspase 8, Bax, and Bcl-2 expression was upregulated in both groups studied. IL-2 expression was down regulated in both infected groups. TNF-/TGF- was upregulated in asymptomatic dogs and down regulated in symptomatic dogs. Renal inflammation in VL is not associated with tissue infection. Our studies reveal an additional role for IL-4 in the negative regulation of chemokine expression associated with Th1 recruitment to inflamed tissues. IFN- , TNF-, IL-4, IL-12 and IL-10 may be used as inflammatory markers for symptomatic infection in kidney. Therefore, in kidneys of Leishmania infected dogs, apoptosis may also occur in active inflammation, and seems to be balancing inflammatory recruitment. In conclusion, our results suggested that the renal fibrosis as an eventual consequence of immunopathologic mechanisms, involving injury of the vasculature and of the stroma; and, importantly, our study suggest an IL-13-driven pathway of fibrogenesis that is TGF- dependent.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGLeishmaniose visceralMorfologiaRinsApoptoseInflamaçãoFibrose renalFibroseRimLeishmaniose visceral caninaApoptoseInflamaçãoResposta inflamatória, apoptose e fibrose renal na Leishmaniose visceral canina: estudo histomorfométrico e molecularinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtesefinalblavaacvpronta.pdfapplication/pdf3686084https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-9W9KKM/1/tesefinalblavaacvpronta.pdf28a2094c3a2851fbb83a4a49e853caccMD51TEXTtesefinalblavaacvpronta.pdf.txttesefinalblavaacvpronta.pdf.txtExtracted texttext/plain188713https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-9W9KKM/2/tesefinalblavaacvpronta.pdf.txtfa39825ae98f506712abef18ebfe876bMD521843/BUBD-9W9KKM2019-11-14 08:45:52.159oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-9W9KKMRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T11:45:52Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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