Análise da ativação e relevância funcional de vias sinalizadoras celulares durante a infecção pelo Vaccinia virus Belo Horizonte

• Autor(a) principal: Jonas Dutra Albarnaz
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/41884
• topic: Vaccinia virus; VBH; VACV-WR; MAPK; PI3K/Akt; Interação vírus-hospedeir; Microbiologia; Vírus Vaccinia; Fosfatidilinositol 3-Quinase; Sistema de Sinalização das MAP Quinases

Durannte a infecção, os vírus usurpam a maquinaria celular em seu benefício e, ao mesmo tempo, evadem às respostas antivirais do hospedeiro, com vistas à eficiente geração e disseminação da sua progênie. Os poxvírus codificam uma miríade de proteínas envolvidas na evasão imune e também manipulam a ativação de vias sinalizadoras, a fim de tornar o ambiente intracelular mais propício à sua multiplicação. No Brasil, diferentes amostras de Vaccinia virus (VACV) têm sido isoladas a partir de infecções que acometem roedores, bovinos e humanos, caracterizando-as como zoonoses emergentes. Estas amostras de VACV isoladas a partir de infecções naturais constituem uma ferramenta muito útil ao estudo da interação poxvírus-hospedeiro. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi analisar a ativação e o envolvimento de vias sinalizadoras celulares durante a infecção pelo VACV Belo Horizonte (VBH), isolado durante um surto de varíola murina no Centro de Bioterismo da UFMG, em comparação ao VACV Western Reserve (VACV-WR). Neste estudo, mostrou-se que durante a infecção de células A31 (fibroblastos 3T3 de camundongos Balb/C), a ativação das MAPK MEK/ERK, JNK e p38, e de PI3K/Akt foi temporalmente regulada de modo semelhante por ambos os vírus. Entretanto, a inibição farmacológica de MEK/ERK (UO126), PI3K/Akt (LY294002) e JNK (JNK inhibitor VIII) não afetou significativamente a multiplicação do VBH (inibição ≤ 50%), ao contrário do observado para VACV-WR. Já a inibição de p38 (SB202190) reduziu a progênie do VBH em 90%, mas não afetou o VACV-WR. Genisteína (inibidor de proteínas tirosina quinases) e dois inibidores sabidamente inespecíficos (SP600125 e Akt inhibitor IV) inibiram igualmente a multiplicação do VBH e do VACV-WR, ressaltando suas potenciais atividades antivirais. Em presença de LY294002, a multiplicação do VBH, assim como a síntese de proteínas virais precoces e tardias foram apenas retardadas mas não inibidas, como para o VACV-WR. A morfogênese do VBH também se procedeu normalmente em presença de LY294002. Entretanto, diferente do VACV-WR, apoptose foi desencadeada durante a infecção pelo VBH, independentemente da inibição de PI3K/Akt. Apesar disso, quatro genes virais (B13R, E3L, F1L e N1L) diretamente envolvidos na inibição da apoptose não apresentaram polimorfismos no VBH. Ambos os vírus multiplicaram em macrófagos de camundongo, mas o VBH induziu 2 log10 menos a expressão de citocinas inflamatórias que o VACV-WR. Em conclusão, estes dados indicam que, a despeito da grande similaridade genética entre VBH e VACV-WR, estas duas amostras de VACV apresentam diferenças biológicas que certamente refletem na patogênese destes vírus in vivo.