Amplificação da sequência de inserção IS6110 diretamente do esfregaço das lâminas coradas para bacilo álcool- ácido resistente

• Autor(a) principal: Isabela Neves de Almeida
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-96SJN4
• topic: PCR IS6110; Esfregaço em lâminas; M tuberculosis; Tuberculose; BAAR; Mycobacterium tuberculosis; Sensibilidade e especificidade; Código genético; Tuberculose pulmonar/diagnóstico; Valor preditivo dos testes; Medicina tropical; Reação em cadeia da polimerase; Laminas; Meios de cultura; Escarro

A obtenção de DNA a partir de lâminas é uma alternativa valiosa para resolver o problema do transporte do espécime, principalmente em locais onde a própria geografia é um empecilho para o acesso às amostras, e a reação de PCR tem se destacado como uma promissora técnica molecular para o diagnóstico rápido da tuberculose. Foram selecionadas duzentos e oitenta e sete amostras de conveniência, provenientes do Laboratório da Faculdade de Medicina/Laboratório de Micobactérias/Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais. O DNA foi extraído pelo método de Chelex +NP40, e amplifcado pela PCR IS6110 nas seguintes condições: 7,0µL de Buffer (10x), 3,0 µL MgCl2 (50mM), 0,2 µL dNTP (25mM), 25 pmol de cada oligonucleotídeo (IS1- 5 CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG 3 e IS2- 5 CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG 3) e 0,5 µL de Taq DNA Polimerase (500U) Invitrogen ®, em um volume final de 50 L. A desnaturação incial do DNA, foi a 94°C por 2mim , e um total de 40 ciclos de 94ºC por 30 seg, 68ºC por 2 min, 71ºC for 1mim, e uma extensão final de 72°C por 10min. Os amplicons foram revelados em gel de agarose á 2% corados por brometo de etídio. A sensibilidade e especificidade comparada com a cultura positiva para M. tuberculosis em meio de Lowestein Jensen foram de 37,5 e 100%, respectivamente. O valor preditivo positivo de 100%, valor preditivo negativo de 80,8 % e uma acurácia de 82,8%. A alta especificidade da amplificação do DNA in house, torna este método um procedimento rápido, simples e eficaz para o diagnóstico da tuberculose, podendo ser utilizado em casos de baciloscopias positivas em locais com alta prevalência da Micobactérias Não tuberculosas. Além da biossegurança no transporte, a PCR em lâminas também pode ser aplicada em situações onde a quantidade de células bacterianas é insuficiente para o diagnóstico. Portanto esse método é uma importante ferramenta quando associado a outros critérios diagnósticos, otimizando o tratamento e contribuindo para interrupção da cadeia de transmissão.