A influência temporal na inflamação cardíaca em um modelo da cardiomiopatia de Takotsubo

• Autor(a) principal: Bruno de Lima Sanches, Marcos dos Santos Inácio Eliezeck, Fernando Pedro de Souza Neto, Anderson Kenedy Santos, Cibele Rocha Resende, Silvia Carolina Guatimosim Fonseca
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/53923
• topic: Coração; Takotsubo; Inflamação; Ciclo Claro-Escuro; Isoproterenol; Fisiologia; Coração; Cardiomiopatia de Takotsubo; Inflamação; Ritmo Circadiano; Isoproterenol

A cardiomiopatia de Takotsubo (CT) representa uma importante causa de hospitalizações por eventos cardíacos agudos. Ela ocorre principalmente em mulheres após a menopausa em resposta a fatores estressores de origem emocional ou física, onde a liberação de catecolaminas hiperestimula o tecido cardíaco levando a modificações deletérias. É sabido que eventos cardíacos graves, como o infarto agudo do miocárdio, ocorrem com mais frequência em certos horários do dia. De forma semelhante, eventos fisiológicos que participam da patogênese destas doenças, como a inflamação, também apresentam uma ritimicidade circadiana. Sendo assim, o intuito deste trabalho é avaliar o impacto temporal no remodelamento cardíaco que ocorre na CT induzida por uma alta dose de isoproterenol (ISO), tendo como foco principal o componente inflamatório. Para isso camundongos fêmeas, C57BL/6 (8 a 12 semanas de idade) foram distribuídos em 4 grupos: (1) tratado com salina no ZT0 (7h da manhã, CTRL ZT0); (2) tratado com ISO -/- (300mg/kg no ZT0, ISO ZT0), e os grupos 3 e 4, tratados da mesma forma no ZT12 (que corresponde as 7h da noite, CTRL ZT12 e ISO ZT12). Três dias após o tratamento os animais foram sacrificados e o tecido cardíaco foi coletado. Houve um aumento da massa cardíaca normalizada pelo peso corporal e pelo comprimento da tíbia (HW/BW e HW/TL) maior nos animais tratados com ISO no ZT12 vs ZT0. Além disso, houve uma perda de peso maior nos animais tratados no ZT12 vs ZT0. Confirmando os resultados da razão de HW/TL, observamos por meio da sonda fluorescente WGA que o ISO induz um aumento da área transversal dos cardiomiócitos (CSA) maior nos animais tratados no ZT12 vs ZT0. Também foi observado pela marcação de hematoxilina e eosina (H&E), que os animais tratados no ZT12 tiveram um infiltrado inflamatório mais proeminente, além de maior deposição de material eosinofílico amorfo característico de necrose tecidual. Marcação do coração com o corante Evans Blue, indicou que o ISO induziu um aumento da morte celular similar nos animais tratados, independentemente do ZT. Por meio do uso do PicroSirius, observou-se que o ISO não induziu deposição de colágeno total, resultado que foi confirmado com o modelo transgênico reporter MYH7-YFP. Neste modelo, os cardiomiócitos fluorescem ao expressar a proteína MYH7, que está envolvida com o estresse cardíaco principalmente por fibrose. O perfil do infiltrado inflamatório presente no tecido cardíaco foi avaliado por citometria de fluxo, onde observamos um aumento de leucócitos (células CD45+), neutrófilos (células Ly6G+), macrófagos (células CD45+Ly6G-Ly6CintCD64high) e monócitos (células CD45+Ly6G-Ly6ChighCD64int) restrito aos animais tratados no ZT12. Sabendo que os macrófagos compreendem um tipo celular importante na patogênese da CT, decidimos investigar seus subtipos por um gating adicional na citometria de fluxo. Enquanto foi observado um aumento de células CCR2+MHC-IIhigh nos animais tratados em ambos os ZTs, o aumento de macrófagos CCR2-MHC-IIlow monócitos CCR2+MHC-IIlow foi restrito aos animais tratados no ZT12. Por fim, não verificamos um aumento de células CCR2-MHC-IIhigh nos animais tratados com ISO em ambos os ZTs. Este resultado foi confirmado por imunofluorescência, onde encontramos um aumento da marcação do CD68 nos animais tratados no ZT12 vs ZT0. Em conjunto, estes resultados indicam que o recrutamento de monócitos para o coração é maior no ZT12. Desta forma, resolvemos avaliar a presença de remodelamento e do infiltrado inflamatório 24h após o insulto com ISO, que representa o tempo em que os monócitos começam a se infiltrar no coração. 24h após o tratamento com ISO, apenas animais tratados com ISO no ZT0 apresentaram um aumento da razão HW/BW e perda de peso. Análise da área da fibra muscular indicou a ocorrência de hipertrofia em animais tratados em ambos os ZTs. Por imunofluorescência, houve um aumento da marcação com CD68 apenas nos animais ISO ZT12. Com isso, concluímos que a resposta inflamatória que ocorre em resposta ao ISO sofre uma influência temporal, sendo mais severa na fase escura do que na clara. Estes dados são importantes para o entendimento dos mecanismos envolvidos na CT e reforçam a importância do entendimento acerca do impacto do horário do dia para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas mais eficazes.