Efeito inibitório da rPnTx1 em canais de sódio ativados por voltagem

• Autor(a) principal: Anita de Oliveira Silva
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-97PFCN
• topic: Bioquímica e Imunologia; Bioquímica; Phoneutria nigriventer; Canais de sódio; Toxina recombinante

A toxina PnTx1 representa aproximadamente 0,45% da proteína total do veneno da aranha Phoneutria nigriventer e foi expressa em forma recombinante (rPnTx1). Por causa de seus efeitos fisiológicos semelhantes aos da PnTx1, a rPnTx1 torna-se uma nova e interessante ferramenta para o estudo da fisiologia molecular dos canais de sódio. O objetivo do presente estudo é caracterizar o efeito eletrofisiológico da rPnTx1 em diferentes isoformas dos canais de sódio ativados por voltagem de mamíferos e artrópodes. Para experimentos eletrofisiológicos com neurônios dos Gânglios da Raiz Dorsal de ratos, era utilizada a técnica de patch clamp na modalidade whole cell. Ocorreu inibição das correntes de sódio de 38,4+6,1% em perfusão com solução contendo 1,5 M de rPnTx1. Para o registro das correntes iônicas em ovócitos de Xenopus laevis, foi utilizada a técnica de voltage clamp com dois microeletrodos. Após testar o efeito da rPnTx1 em diferentes isoformas de canais de sódio ativados por voltagem, a seguinte ordem de seletividade foi encontrada: rNaV1.2 > rNaV1.7 rNaV1.4 > rNaV1.3 > mNaV1.6 > hNaV1.8. Nenhum efeito foi observado na isoforma hNaV1.5 e em isoformas de canais provenientes de artrópodes. A dependência de concentração da rPnTx1 foi comparada com a toxina nativa na isoforma rNaV1.2, mostrando a mesma inibição máxima (PnTx1: 85 + 0,8%; rPnTx1: 83,3 + 1,9%), mas o IC50 da toxina recombinante (IC50: 33,7 nM) é significativamente menor que o IC50 de toxina nativa (IC50: 104,8 nM). Por ter uma alta seletividade relativa para canais de sódio neuronais, a rPnTx1 torna-se uma ferramenta importante para estudos estruturais e farmacológicos.