Frequência e variabilidade genética de Giardia duodenalis em cães do município de Cuiabá - Mato Grosso, Brasil

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Trevisan, Yolanda Paim Arruda
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMT
Texto Completo: http://ri.ufmt.br/handle/1/4513
Resumo: Giardia duodenalis is a unicellular, eukaryotic and flagellated protozoan. Two evolutionary forms are observed in the life cycle: trophozoite and cyst, the cyst being the infectious form. This protozoan is responsible for causing diarrhea in humans, dogs, cats, rodents and ungulate animals. Despite being morphologically equal, the isolates of G. duodenalis hide great genetic diversity and hinder the stability and unanimity of the taxonomic classification. So far, eight assemblages called A-H have been identified. Currently, multilocus genotyping is used for the molecular identification of Giardia species and / or genotypes. In order to identify the frequency of G. duodenalis in the feces of dogs domiciled in the city of Cuiabá, Mato Grosso, and to characterize the genetic variability of positive samples, fecal samples were collected from 147 dogs. To perform screening, all samples were subjected to centrifugal- fluctuation examination for viewing under a microscopy. Of all samples collected, 26 dogs were infected with intestinal parasites, 38% (10) of whom were affected by G. duodenalis. The frequency of G. duodenalis in dogs was 6.8%. Other parasites have been observed, such as Cystoisospora sp. (15%) and Entamoeba sp. (2%), in addition to the Ancylostoma sp. (27%), Trichuris sp. (2%) and Toxocara sp. (1%). The positive samples for G. duodenalis were submitted to DNA extraction to perform the Chain Reaction by the Polymerase of the genes triosephosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh) for amplification of the fragment of 530 and 659 bp, respectively, for genotypic characterization. The analysis of risk factors for dogs infected with G. duodenalis, was not significant regarding sex, breed, age, presence of diarrhea and diet. Only dogs with contacts were significantly positive for giardiasis. After molecular analysis of G. duodenalis isolates, only three samples amplified a fragment of the tpi gene showing 100% identity with Assemblage C. For genetic analysis of the sequences, the phylogenetic tree was built from the concatenated sequences of the gdh and tpi genes to determine the assemblage with greater precision.The sample identified in this study was grouped in the same clade as assemblage C, corroborating the sequence obtained by the tpi. Multilocus genotyping is the most reliable method for determining the assemblages of G. duodenalis, since discrepancies between the loci of the same isolate can occur due to mixed infections and/or heterozygosis.
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In order to identify the frequency of G. duodenalis in the feces of dogs domiciled in the city of Cuiabá, Mato Grosso, and to characterize the genetic variability of positive samples, fecal samples were collected from 147 dogs. To perform screening, all samples were subjected to centrifugal- fluctuation examination for viewing under a microscopy. Of all samples collected, 26 dogs were infected with intestinal parasites, 38% (10) of whom were affected by G. duodenalis. The frequency of G. duodenalis in dogs was 6.8%. Other parasites have been observed, such as Cystoisospora sp. (15%) and Entamoeba sp. (2%), in addition to the Ancylostoma sp. (27%), Trichuris sp. (2%) and Toxocara sp. (1%). The positive samples for G. duodenalis were submitted to DNA extraction to perform the Chain Reaction by the Polymerase of the genes triosephosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh) for amplification of the fragment of 530 and 659 bp, respectively, for genotypic characterization. The analysis of risk factors for dogs infected with G. duodenalis, was not significant regarding sex, breed, age, presence of diarrhea and diet. Only dogs with contacts were significantly positive for giardiasis. After molecular analysis of G. duodenalis isolates, only three samples amplified a fragment of the tpi gene showing 100% identity with Assemblage C. For genetic analysis of the sequences, the phylogenetic tree was built from the concatenated sequences of the gdh and tpi genes to determine the assemblage with greater precision.The sample identified in this study was grouped in the same clade as assemblage C, corroborating the sequence obtained by the tpi. Multilocus genotyping is the most reliable method for determining the assemblages of G. duodenalis, since discrepancies between the loci of the same isolate can occur due to mixed infections and/or heterozygosis.Giardia duodenalis é um protozoário unicelular, eucarioto e flagelado. Duas formas evolutivas são observadas no ciclo de vida: trofozoíto e cisto, sendo o cisto a forma infectante. Este protozoário é responsável por causar quadros de diarreia em humanos, cães, gatos, roedores e animais ungulados. Apesar de serem morfologicamente iguais, os isolados de G. duodenalis escondem grande diversidade genética e dificultam a estabilidade e unanimidade da classificação taxonômica. Até o momento foram identificados oito assemblages denominados de A-H. Atualmente, a genotipagem multilocus é utilizada para a identificação molecular das espécies e/ou genótipos de Giardia. Com o objetivo de identificar a frequência de G. duodenalis nas fezes de cães domiciliados no município de Cuiabá, Mato Grosso, e caracterizar a variabilidade genética das amostras positivas, foram coletadas amostras de fezes de 147 cães. Para realização de triagem, todas as amostras foram submetidas ao exame de centrífugo-flutuação para visualização em microscopia. De todas as amostras coletadas, 26 cães estavam infectados por parasitos intestinais, sendo 38% (10) acometidos por G. duodenalis. A frequência de G. duodenalis em cães foi de 6,8%. Outros parasitos foram observados, como Cystoisospora sp. (15%) e Entamoeba sp. (2%), além dos nematoides Ancylostoma sp. (27%), Trichuris sp. (2%) e Toxocara sp. (1%). As amostras positivas para G. duodenalis foram submetidas à extração de DNA para realização da Reação em Cadeia pela Polimerase dos genes triosefosfato isomerase (tpi) e glutamato desidrogenase (gdh) para amplificação do fragmento de 530 e 659 pb, respectivamente, para caracterização genotípica. A análise dos fatores de risco para os cães infectados por G. duodenalis., não foi significativa quanto à sexo, raça, idade, presença de diarreia e dieta. Somente cães com contactantes foram significativamente positivos para giardíase. Após análise molecular dos isolados de G. duodenalis, apenas três amostras amplificaram fragmento do gene tpi apresentando 100% de identidade com Assemblage C. Para análise genética das sequências, foi construído a árvore filogenética a partir das sequências concatenadas dos genes gdh e tpi para determinar o assemblage com maior precisão. A amostra identificada neste estudo ficou agrupada no mesmo clado do assemblage C corroborando com a sequência obtida pelo tpi. A genotipagem multilocus é o método mais confiável para determinar os assemblages de G. duodenalis, uma vez que discrepâncias entre os locus de um mesmo isolado podem ocorrer devido a infecções mistas e/ou heterozigose.Universidade Federal de Mato GrossoBrasilFaculdade de Medicina Veterinária (FAVET)UFMT CUC - CuiabáPrograma de Pós-Graduação em Ciências VeterináriasSousa, Valéria Régia FrancoNakazato, Lucianohttp://lattes.cnpq.br/3898850578198054http://lattes.cnpq.br/7722685703977701Sousa, Valéria Régia Franco588.319.911-91http://lattes.cnpq.br/7722685703977701Pacheco, Richard de Campos791.476.071-49http://lattes.cnpq.br/5213594247690553588.319.911-91638.389.071-91Yamanaka, Andreia Rizzieri630.280.001-30http://lattes.cnpq.br/7143453667270027Trevisan, Yolanda Paim Arruda2023-07-24T16:11:20Z2020-03-052023-07-24T16:11:20Z2020-02-27info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisTREVISAN, Yolanda Paim Arruda. Frequência e variabilidade genética de Giardia duodenalis em cães do município de Cuiabá - Mato Grosso, Brasil. 2020. 53 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Mato Grosso, Faculdade de Medicina Veterinária, Cuiabá, 2020.http://ri.ufmt.br/handle/1/4513porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMTinstname:Universidade Federal de Mato Grosso (UFMT)instacron:UFMT2023-07-27T07:04:49Zoai:localhost:1/4513Repositório InstitucionalPUBhttp://ri.ufmt.br/oai/requestjordanbiblio@gmail.comopendoar:2023-07-27T07:04:49Repositório Institucional da UFMT - Universidade Federal de Mato Grosso (UFMT)false
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description Giardia duodenalis is a unicellular, eukaryotic and flagellated protozoan. Two evolutionary forms are observed in the life cycle: trophozoite and cyst, the cyst being the infectious form. This protozoan is responsible for causing diarrhea in humans, dogs, cats, rodents and ungulate animals. Despite being morphologically equal, the isolates of G. duodenalis hide great genetic diversity and hinder the stability and unanimity of the taxonomic classification. So far, eight assemblages called A-H have been identified. Currently, multilocus genotyping is used for the molecular identification of Giardia species and / or genotypes. In order to identify the frequency of G. duodenalis in the feces of dogs domiciled in the city of Cuiabá, Mato Grosso, and to characterize the genetic variability of positive samples, fecal samples were collected from 147 dogs. To perform screening, all samples were subjected to centrifugal- fluctuation examination for viewing under a microscopy. Of all samples collected, 26 dogs were infected with intestinal parasites, 38% (10) of whom were affected by G. duodenalis. The frequency of G. duodenalis in dogs was 6.8%. Other parasites have been observed, such as Cystoisospora sp. (15%) and Entamoeba sp. (2%), in addition to the Ancylostoma sp. (27%), Trichuris sp. (2%) and Toxocara sp. (1%). The positive samples for G. duodenalis were submitted to DNA extraction to perform the Chain Reaction by the Polymerase of the genes triosephosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh) for amplification of the fragment of 530 and 659 bp, respectively, for genotypic characterization. The analysis of risk factors for dogs infected with G. duodenalis, was not significant regarding sex, breed, age, presence of diarrhea and diet. Only dogs with contacts were significantly positive for giardiasis. After molecular analysis of G. duodenalis isolates, only three samples amplified a fragment of the tpi gene showing 100% identity with Assemblage C. For genetic analysis of the sequences, the phylogenetic tree was built from the concatenated sequences of the gdh and tpi genes to determine the assemblage with greater precision.The sample identified in this study was grouped in the same clade as assemblage C, corroborating the sequence obtained by the tpi. Multilocus genotyping is the most reliable method for determining the assemblages of G. duodenalis, since discrepancies between the loci of the same isolate can occur due to mixed infections and/or heterozygosis.
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