Avaliação da atividade anti-Trypanosoma cruzi in vitro e in vivo do composto silibinina isolado e associado ao benznidazol.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Torchelsen, Fernanda Karoline Vieira da Silva
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFOP
Texto Completo: http://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/13890
Resumo: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.
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spelling Avaliação da atividade anti-Trypanosoma cruzi in vitro e in vivo do composto silibinina isolado e associado ao benznidazol.Trypanosoma cruziQuimioterapiaMedicamentos - utilizaçãoPrograma de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.A doença de Chagas (DC) é uma doença parasitária endêmica na América Latina e encontrada em diversos países no mundo. Seu tratamento é feito com o benznidazol (BZ) e o nifurtimox (NF), ambos fármacos com baixa eficácia terapêutica na maoria dos pacientes em fase crônica tardia da DC, e que causam vários efeitos colaterais. A busca por novos fármacos para a DC é estimulada entre produtos naturais e em estratégias como associação de fármacos. A silibinina (SLB) é um composto natural capaz de inibir a proteína de efluxo (Pgp) nas membranas celulares, induzir a morte de microrganismos, além de possuir atividade anti-inflamatória. Ainda não há na literatura relato de sua atividade em T. cruzi. Neste trabalho foi avaliada a atividade in vitro e in vivo de SLB e de SLB associada a BZ (SLB+BZ) frente a cepa Y de T. cruzi. Foi realizado ensaio de citotoxicidade pelo método de MTT em células VERO (24h), que revelou IC50 de 250,22 µM para a SLB. A atividade tripanocida avaliada por método com resazurina em epimastigotas (24h) mostrou que a SLB 25 µM inibiu o crescimento dos parasitos. O ensaio em amastigotas revelou índice de seletividade de 3,13, além de mostrar a maior porcentagem de inibição (> 90%) quando a SLB foi usada na associação de SLB100+BZ10µM, em comparação com SLB (100; 25; 6,25 µM) ou BZ (10; 5; 2,5 µM) isolados. No ensaio in vivo, camundongos Swiss comprovadamente infectados IP com 10.000 tripomastigotas sanguíneos foram tratados por via oral por 20 dias consecutivos com SLB50, SLB150, SLB50+BZ25, SLB50+BZ50, SLB50+BZ100, SLB150+BZ25, SLB150+BZ50, SLB150+BZ100, BZ25, BZ50 e BZ100 mg/kg/dia. Os animais foram avaliados diariamente na fase aguda (parasitemia) e aos 90, 180 e 240 dias após tratamento por hemocultura, qPCR de eluato sanguíneo e sorologia (ELISA). Após a eutanásia, foram feitas, além das avaliações anteriores, a qPCR do tecido cardíaco. Os resultados in vivo demonstraram que a SLB em monoterapia não foi capaz de controlar a parasitemia e a mortalidade dos animais. As avaliações parasitológicas mostraram 100% de negatividade na maioria dos grupos de animais tratados com combinação de drogas ou doses menores de BZ, enquanto a sorologia foi positiva em todos os animais não sendo constatada cura pelo critério clássico. Entretanto verificamos que os grupos experimentais tratados com BZ em menores doses e que os tratados com BZ em menores doses quando associado a SLB apresentaram maior negatividade nos exames parasitológicos, porém sem diferenças significativas entre os demais grupos. Análise histopatológica cardíaca será feita para avaliar se houve redução da inflamação/fibrose entre os grupos tratados com a associação SLB+BZ versus BZ.Chagas' disease (CD) is an endemic parasitic disease in Latin America and found in many countries worldwide. Its usual treatment is with benznidazole (BZ) and nifurtimox (NF), both with low efficacy in most patients in the late chronic phase of infection and cause several side effects. The search for new drugs for CD is stimulated between natural products and strategies such as drug association are stimulated. Silibinin (SLB) is a natural compound able to inhibit the efflux of protein (Pgp) in cell membranes, induce death of microorganism’s specie, and presents anti-inflammatory activity. There is no report of SLB activity in T. cruzi in the literature. In this work the in vitro and in vivo activity of SLB and SLB associated with BZ (SLB + BZ) were evaluated against an isolate of the T. cruzi strain Y. Cytotoxicity assay was performed by the MTT method in VERO cells (24h), which revealed an IC50 of 250.22 μM for SLB. The trypanocidal activity evaluated by resazurin method in epimastigotes (24h) showed that SLB 25 μM significantly inhibited the parasites growth. The amastigote assay revealed a selectivity index of 3.13 , in addition showed the higher percentage of inhibition (> 90%) when SLB was used in the association of SLB100 + BZ10 μM, compared with SLB (100; 25; 6.25 μM) or BZ (10; 5; 2.5 μM) isolated. In the in vivo assay, Swiss mice intraperitoneally infected with 10,000 trypomastigotes were orally treated for 20 consecutive days with SLB50, SLB50 + BZ25, SLB50 + BZ50, SLB50 + BZ100, SLB150 + BZ25, SLB150 + BZ50, SLB150 + BZ100, BZ25, BZ50 and BZ100 mg/kg/day. During the acute phase the animals were evaluated daily (parasitemia) and at 90, 180 and 240 days after treatment by blood culture, blood eluate qPCR and serology (ELISA). After euthanasia, qPCR of cardiac tissue was performed in addition to previous evaluations. In vivo results demonstrated that SLB monotherapy was not able to control the parasitemia and mortality of the animals. The parasitological evaluations showed 100% of negativation in the majority of the groups of animals treated with association of drugs or with smaller doses of BZ, whereas the serology was positive in all animals and no cure was observed by the classic criterion. However, we verified that the experimental groups treated with BZ in lower doses and those treated with BZ in lower doses when associated with SLB presented higher negativation in the parasitological exams, but without significant differences between the other groups. Cardiac histopathological analysis will be performed to evaluate if there was reduction of inflammation/fibrosis between the groups treated with the SLB + BZ association versus BZ.Lana, Marta deSilva, Glenda Nicioli daMurta, Silvane Maria FonsecaBrandão, Geraldo CélioLana, Marta deTorchelsen, Fernanda Karoline Vieira da Silva2021-11-04T23:39:03Z2021-11-04T23:39:03Z2019info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfTORCHELSEN, Fernanda Karoline Vieira da Silva. Avaliação da atividade anti-Trypanosoma cruzi in vitro e in vivo do composto silibinina isolado e associado ao benznidazol. 2019. 85 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2019.http://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/13890http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 27/10/2021 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho, desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFOPinstname:Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP)instacron:UFOP2021-11-04T23:39:11Zoai:repositorio.ufop.br:123456789/13890Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufop.br/oai/requestrepositorio@ufop.edu.bropendoar:32332021-11-04T23:39:11Repositório Institucional da UFOP - Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP)false
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