Desenvolvimento e validação de um método bioanalítico para estudos de farmacocinética e biodistribuição do fármaco anti-chagásico benznidazol em modelo murino.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Melo, Luísa Helena Perin de
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFOP
Texto Completo: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/8542
Resumo: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.
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spelling Melo, Luísa Helena Perin deCarneiro, Cláudia MartinsPeccinini, Rosângela GonçalvesVieira Filho, Sidney AugustoBarcellos, Neila Marcia SilvaCarneiro, Cláudia MartinsVieira, Paula Melo de Abreu2017-08-23T18:04:47Z2017-08-23T18:04:47Z2015MELO, Luísa Helena Perin de. Desenvolvimento e validação de um método bioanalítico para estudos de farmacocinética e biodistribuição do fármaco anti-chagásico benznidazol em modelo murino. 2015. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2015.http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/8542Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.O benznidazol (BNZ) é o único fármaco empregado no tratamento da doença de Chagas no Brasil. Parte da ineficiência do BNZ pode estar relacionada a sua distribuição inadequada entre os tecidos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi monitorar e avaliar os perfis farmacocinéticos do BNZ em amostras de plasma e tecidos de camundongos. Para isso foi desenvolvido e validado um método bioanalítico utilizando CLAE-UV destinado a quantificar o BNZ e o padrão interno em matrizes biológicas previamente tratadas pela extração líquido-líquido com acetato de etila e validado de acordo com as especificações da European Medicines Agency – Science Medicines Health (EMEA). O método desenvolvido foi linear na faixa de concentração de 0,1 a 100,0 μg/mL para o baço, cérebro, coração, cólon, duodeno, plasma, pulmão e rim e 0,2 a 100,0 μg/mL para estômago e fígado e demonstrou ser sensível com resultados precisos e exatos. Além disso, constatou-se a estabilidade do BNZ ao ser submetido a diferentes condições de manipulação exigidas pelo método. Para os estudos de farmacocinética e biodistribuição foram utilizados cinquenta camundongos Swiss, fêmeas, com trinta dias de idade, necropsiados nos tempos de 0,16; 0,33; 0,50; 0,75; 1; 2; 3; 4; 5 e 6 hs após a administração, por gavagem, de uma dose única de 100 mg/kg de BNZ, após jejum de doze horas. Os parâmetros farmacocinéticos foram determinados aplicando o modelo monocompartimental. A absorção do BNZ foi relacionada com os dados de área sob a curva (ASC), concentração plasmática máxima (Cmáx) e o tempo para atingir a concentração máxima (tmáx). A distribuição reversível do fármaco da circulação para os tecidos e órgãos foi relacionada ao volume de distribuição (Vd/F). O metabolismo do fármaco foi representado pela meia-vida de eliminação (t1/2β) e sua excreção pelo Clearance (Cl/F). Além disso, foi calculado o tempo médio de residência (TMR). Os parâmetros farmacocinéticos confirmam a rápida absorção do BNZ, quando administrado por via oral e os parâmetros de biodistribuição demonstraram que, em geral, apesar das concentrações nos órgãos terem sido diferentes, a t½β e o TMR foram semelhantes: plasma (Cmáx=41,61μg/mL; tmáx=0,83h; MRT=3,86h; t1/2β=2,03h; Vd/F=38,81mL; Cl/F=13,29mL/h), estômago (Cmáx=127,95 μg/mL; tmáx=0,67h e MRT=2,66h), pulmão (Cmáx=34,58μg/mL; tmáx=0,63h e MRT =2,74h), coração (Cmáx=21,68μg/mL; tmáx=0,67h e MRT =2,42h), cólon (Cmáx=18,11 μg/mL; tmáx=0,67h e MRT =2,03h) baço (Cmáx=27,73μg/mL; tmáx=0,58h e MRT =1,79h), duodeno (Cmáx=8,48μg/mL; tmáx=0,83h e MRT =2,14h), cérebro (Cmáx=12,39 μg/mL; tmáx=0,75h e MRT =2,01h), rim (Cmáx=6,98μg/mL; tmáx=0,49h e MRT =2,00h) e fígado (Cmáx=1,76μg/mL; tmáx=0,75h e MRT 3,41h). A biodistribuição do BNZ ocorre de maneira ampla, atingindo altas concentrações inclusive nos órgãos de maior relevância na infecção pelo Trypanosoma cruzi, coração e cólon.The benznidazole (BNZ) is the only drug employed in the treatment of Chagas disease in Brazil. A part of BNZ inefficiency could be related to its inadequate distribution between the tissues. Thus, the aim of this work was to monitor and evaluate the pharmacokinetic profiles of BNZ in samples of plasma and tissues of mice. For this, a bioanalitic method was developed and validated, using HPLC-UV destined to quantify the BNZ and the internal standard in biological matrices previously treated by the liquid-liquid extraction with ethyl acetate and validated according to the specifications of European Medicines Agency – Science Medicines Health (EMEA). The method developed was linear over the concentration range of 0,1 to 100,0 μg/mL for the spleen, brain, heart, colon, duodenum, plasm, lung and kidney and 0,2 a 100,0 μg/mL for the stomach and liver and demonstrated that is sensitive with accurate and exacts results. Furthermore, it was found the BNZ stability when subjected to different conditions of manipulation required by the method. For the pharmacokinetic studies and biodistribution, it was used fifty Swiss female mice, with thirty days of life, necropsied in times of 0,16; 0,33; 0,50; 0,75; 1; 2; 3; 4; 5 and 6 hours after the administration, by gavage, of an only dose of 100 mg/kg of BNZ, after fasting of twelve hours. The pharmacokinetic parameters were determined applying the unicompartmental model. The absorption of BNZ was related to the data of area under the curve (AUC), maximal concentration in plasma (Cmáx) and the time to occurrence of concentration maximal (tmáx). The reversible distribution of the drug of circulation to the tissues and organs was related to the distribution volume (Vd/F). The drug metabolism was represented by elimination half-life (t1/2β) and its excretion by Clearance (Cl/F). Furthermore, the residence mean time (MRT) was calculated. The pharmacokinetic parameters confirmed BNZ rapid absorption when administered orally and the biodistribution parameters showed that, in general, although the concentrations in the organs were different, the tmáx and MRT were similar. The BNZ that was found in plasm and tissues presented the following pharmacokinetic parameters: plasm (Cmáx=41,61μg/mL; tmáx=0,83h; MRT=3,86h; t1/2β=2,03h; Vd/F=38,81mL; Cl/F=13,29mL/h), stomach (Cmáx=127,95 μg/mL; tmáx=0,67h e MRT=2,66h), lung (Cmáx=34,58μg/mL; tmáx=0,63h e MRT =2,74h), heart (Cmáx=21,68μg/mL; tmáx=0,67h e MRT =2,42h), cólon (Cmáx=18,11 μg/mL; tmáx=0,67h e MRT =2,03h) spleen (Cmáx=27,73μg/mL; tmáx=0,58h e MRT =1,79h), duodenum (Cmáx=8,48μg/mL; tmáx=0,83h e MRT =2,14h), brain (Cmáx=12,39 μg/mL; tmáx=0,75h e MRT =2,01h), kidney (Cmáx=6,98μg/mL; tmáx=0,49h e MRT =2,00h) e liver (Cmáx=1,76μg/mL; tmáx=0,75h e MRT 3,41h). The biodistribution of BNZ occurs broadly, reaching high concentrations in the most relevant bodies in Trypanosoma cruzi infection, heart and colon.Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 07/03/2017 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação.info:eu-repo/semantics/openAccessCromatografia líquida de alta eficiênciaFarmacocinéticaFármacosDoença de ChagasDesenvolvimento e validação de um método bioanalítico para estudos de farmacocinética e biodistribuição do fármaco anti-chagásico benznidazol em modelo murino.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFOPinstname:Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP)instacron:UFOPLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-8924http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/8542/5/license.txt62604f8d955274beb56c80ce1ee5dcaeMD55CC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-849http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/8542/2/license_url4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2fMD52license_textlicense_texttext/html; charset=utf-80http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/8542/3/license_textd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD53license_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-80http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/8542/4/license_rdfd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD54ORIGINALDISSERTACAO_DesenvolvimentoValidaçãoMétodo.pdfDISSERTACAO_DesenvolvimentoValidaçãoMétodo.pdfapplication/pdf1896998http://www.repositorio.ufop.br/bitstream/123456789/8542/1/DISSERTACAO_DesenvolvimentoValida%c3%a7%c3%a3oM%c3%a9todo.pdf6bf20910db6a0ad30c6300ea740a3772MD51123456789/85422020-01-22 07:49:50.901oai:localhost: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ório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufop.br/oai/requestrepositorio@ufop.edu.bropendoar:32332020-01-22T12:49:50Repositório Institucional da UFOP - Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP)false
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