Desenvolvimento de linhagens de células murinas knockout para o Gene Trp53 via crispr/cas9

• Autor(a) principal: Nogueira, Marina Bizerril
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFOR
• Texto Completo: https://biblioteca.sophia.com.br/terminalri/9575/acervo/detalhe/127446
• topic: Câncer - Tratamento; Engenharia genética; Células-Tronco

Com o avanço das tecnologias, o emprego da engenharia genética tem sido uma importante ferramenta na descoberta de terapias específicas como alternativa de tratamento. O sistema CRISPR/Cas9 tem agido como facilitador nesses estudos efetuando mutações sítio-dirigidas para identificar o mecanismo de ação de substâncias e seus respectivos alvos em modelos in vitro. Este trabalho objetivou desenvolver uma plataforma para análise e validação de mecanismo de ação de drogas através de linhagens de células knockout para o gene Trp53 via CRISPR/Cas9. Para isso, foi realizado inicialmente o isolamento de células tronco mesenquimais (CTM) da medula óssea de murinos, preparo de vetores CRISPR para knockout de Trp53, transfecção de células tronco mesenquimais e de células N2a e genotipagem por PCR para validação da edição gênica. Mesmo com o isolamento e cultivo inicial ocorrendo sem intercorrências e gerando CTM viáveis, após a transfecção, não observamos crescimento e adesão destas células às placas. Com objetivo de validar as CRISPRs desenhadas, optou-se por utilizar uma linhagem de células do tipo N2a, que apresentaram uma eficiência de 10% para a deleção da região projetada de Trp53 após o isolamento clonal de colônias. Conclui-se que foi possível gerar células geneticamente modificadas com deleção de uma região específica de DNA através do sistema CRISPR. Novas pesquisas são necessárias para a avaliação de efeito de compostos sintéticos para o tratamento do câncer nestas células, podendo contribuir futuramente para a proposição de novas terapias. Palavras-chave: CRISPR/Cas9; Edição Gênica; Células-Tronco Mesenquimais; N2a; Tp53; Câncer;