Tripsinas do peixe guarajuba (Carangoides bartholomaei): extração, purificação e caracterização

• Autor(a) principal: Silva, Thalia Andrade
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPB
• Texto Completo: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/26992
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL; Pesca - Resíduos; Proteases alcalinas; Purificação de enzimas; Fishing - Waste; Alkaline proteases; Enzymes purification

Nos últimos anos o consumo de pescado vem aumentando e sua produção quase triplicou nas últimas décadas. Neste contexto, a espécie Carangoides bartholomaei é um peixe marinho de médio a grande porte muito consumido no litoral nordestino. O acúmulo de resíduos gerados pelo processamento do pescado consumido gera um problema ambiental, causando poluição das águas e do solo quando descartados indevidamente. Entretanto, diversos estudos mostram que esses resíduos podem ser importantes fontes de moléculas bioativas que podem ser aplicadas em processos biotecnológicos e industriais. Com isso, o objetivo deste estudo foi extrair, purificar e caracterizar proteases alcalinas, do tipo tripsina, presentes no ceco pilórico do peixe C. bartholomaei. As tripsinas foram purificadas através de “salting out” e cromatografia líquida de afinidade. A atividade enzimática foi determinada utilizando BApNA como substrato. Os efeitos de agentes químicos, pH e temperatura sobre a atividade enzimática foi avaliado. Foi avaliada a compatibilidade das tripsinas obtidas com sabões comerciais. As tripsinas de C. bartholomaei apresentaram características importantes como temperatura ótima de 50°C, sendo estáveis entre 25°C a 40°C por 60 minutos. O pH ótimo para a atividade enzimática foi o pH 8,0 e foi estável do pH 5,0 ao pH 11,5. O Km foi determinado como 0,73 mM para o BApNA. As tripsinas foram inibidas completamente pelo inibidor TLCK. O HgCl2 inibiu fortemente a atividade enzimática em todas as concentrações testadas, enquanto que o AlCl3 em maiores concentrações promoveu uma leve ativação. Através de SDS-PAGE foi possível observar duas bandas após a cromatografia de afinidade: uma de 20 kDa e outra de 24 kDa. Os testes feitos com diferentes marcas de sabões comerciais mostraram que as tripsinas continuam ativas na presença dessas formulações. Os resultados sugerem que o ceco pilórico de C. bartholomaei é uma fonte para obtenção de tripsinas compatíveis com os componentes de sabões comerciais. As características físico-químicas das tripsinas obtidas sugerem que são enzimas promissoras para outras aplicações industriais e biotecnológicas.