Caracterização e biocontrole de espécies do complexo Fusarium oxysporum oriundas de Vigna unguiculata
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Tese |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/54045 |
Resumo: | Espécies do gênero Fusarium podem acometer diversas culturas de importância econômica. O objetivo deste estudo foi determinar o perfil molecular de isolados do complexo de espécies Fusarium oxysporum (FOSC) obtidos de Vigna unguiculata e avaliar o potencial de controle biológico destes patógenos utilizando a combinação entre isolados de Trichoderma e fungos micorrízicos arbusculares (FMA). Os isolados de Fusarium foram obtidos de culturas de feijão-caupi com sintomas característicos de murcha. Os patógenos obtidos foram identificados molecularmente com base nas regiões gênicas TEF1, RPB2, Cal e também morfologicamente. Para as análises de variabilidade genética entre os isolados de FOSC, foram testados 17 primers do marcador molecular ISSR. Os ensaios in vitro foram realizados utilizando 50 isolados de Trichoderma contra oito isolados de FOSC por meio da técnica de cultura pareada. Os ensaios de biocontrole in vivo foram realizados por meio da aplicação de suspensão de conídios dos isolados patogênicos e dos antagonistas no solo, ao redor de sementes de feijão-caupi e a avaliação realizada 45 dias após a semeadura. O efeito de 50 isolados de Trichoderma sobre a biomassa de feijão-caupi também analisada e avaliados após 22 e 40 dias após a inoculação. Para verificar o potencial antagonista da combinação entre isolados de FMA e Trichoderma foram utilizados 100 glomerosporos dos isolados de FMA Gisgaspora albida e Acaulospora longula e adicionado ao solo uma suspensão contendo 107 conídios mL-1 de T. asperelloides (URM7898) e do isolado ST2 de FOSC após a germinação das sementes. Neste estudo foram obtidos 44 isolados patogênicos oriundos de plantas de V. unguiculata com sintomas característicos de murcha de Fusarium. A partir da análise das sequências de fragmentos amplificados das regiões gênicas TEF1 e RPB2, constatou-se que os isolados estão inseridos no complexo de espécies F. oxysporum. As análises filogenéticas baseadas na combinação do conjunto de dados dos dois genes indicaram o registro da espécie F. nirenbergiae e apoiaram a ocorrência de novas espécies pertencente ao FOSC. Nas análises de variabilidade genética entre os isolados por ISSR, constatou- se que o primer UBC 856 possibilitou a amplificação de todos os produtos dos isolados avaliados e gerou o maior número de bandas polimórficas. Para os testes de patogenicidade, constatou-se que a maioria dos isolados são patogênicos. Verificou-se a partir dos ensaios in vitro que houve redução no crescimento micelial de todos os isolados do fitopatógeno variando entre 50 % a 76,29%. Também foram constatadas reduções significativas da severidade da doença na maioria dos tratamentos que variou de 4,62% a 43,88%. Os isolados de Trichoderma testados quanto ao potencial de promoção de crescimento de plantas de V. unguiculata promoveram aumentos na biomassa após 22 e 40 dias de inoculação dos isolados que variou de 25,07% a 48,62%, respectivamente. Também foram constatadas reduções significativas de sintomas de murcha nos ensaios envolvendo o efeito combinado de Trichoderma e FMA. O estudo relata novas espécies do complexo FOSC associadas à cultura de V. unguiculata no Brasil e demonstra potencial de uso de T. asperelloides (URM7898), G. albida (URM FMA 11) e A. longula (URM FMA 07) para o controle da murcha de Fusarium. |
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Os isolados de Fusarium foram obtidos de culturas de feijão-caupi com sintomas característicos de murcha. Os patógenos obtidos foram identificados molecularmente com base nas regiões gênicas TEF1, RPB2, Cal e também morfologicamente. Para as análises de variabilidade genética entre os isolados de FOSC, foram testados 17 primers do marcador molecular ISSR. Os ensaios in vitro foram realizados utilizando 50 isolados de Trichoderma contra oito isolados de FOSC por meio da técnica de cultura pareada. Os ensaios de biocontrole in vivo foram realizados por meio da aplicação de suspensão de conídios dos isolados patogênicos e dos antagonistas no solo, ao redor de sementes de feijão-caupi e a avaliação realizada 45 dias após a semeadura. O efeito de 50 isolados de Trichoderma sobre a biomassa de feijão-caupi também analisada e avaliados após 22 e 40 dias após a inoculação. Para verificar o potencial antagonista da combinação entre isolados de FMA e Trichoderma foram utilizados 100 glomerosporos dos isolados de FMA Gisgaspora albida e Acaulospora longula e adicionado ao solo uma suspensão contendo 107 conídios mL-1 de T. asperelloides (URM7898) e do isolado ST2 de FOSC após a germinação das sementes. Neste estudo foram obtidos 44 isolados patogênicos oriundos de plantas de V. unguiculata com sintomas característicos de murcha de Fusarium. A partir da análise das sequências de fragmentos amplificados das regiões gênicas TEF1 e RPB2, constatou-se que os isolados estão inseridos no complexo de espécies F. oxysporum. As análises filogenéticas baseadas na combinação do conjunto de dados dos dois genes indicaram o registro da espécie F. nirenbergiae e apoiaram a ocorrência de novas espécies pertencente ao FOSC. Nas análises de variabilidade genética entre os isolados por ISSR, constatou- se que o primer UBC 856 possibilitou a amplificação de todos os produtos dos isolados avaliados e gerou o maior número de bandas polimórficas. Para os testes de patogenicidade, constatou-se que a maioria dos isolados são patogênicos. Verificou-se a partir dos ensaios in vitro que houve redução no crescimento micelial de todos os isolados do fitopatógeno variando entre 50 % a 76,29%. Também foram constatadas reduções significativas da severidade da doença na maioria dos tratamentos que variou de 4,62% a 43,88%. Os isolados de Trichoderma testados quanto ao potencial de promoção de crescimento de plantas de V. unguiculata promoveram aumentos na biomassa após 22 e 40 dias de inoculação dos isolados que variou de 25,07% a 48,62%, respectivamente. Também foram constatadas reduções significativas de sintomas de murcha nos ensaios envolvendo o efeito combinado de Trichoderma e FMA. O estudo relata novas espécies do complexo FOSC associadas à cultura de V. unguiculata no Brasil e demonstra potencial de uso de T. asperelloides (URM7898), G. albida (URM FMA 11) e A. longula (URM FMA 07) para o controle da murcha de Fusarium.CAPESThis study was to determine the molecular profile Fusarium oxysporum species complex (FOSC) isolates from Vigna unguiculata and to evaluate the biological control potential of these pathogens using the combination of Trichoderma isolates and arbuscular mycorrhizal fungi (AMF). Fusarium isolates were obtained from cultures of cowpea with characteristic wilt symptoms. The pathogens obtained were molecularly identified based on TEF1, RPB2, Cal gene regions and also morphologically. For analysis of genetic variability among FOSC isolates, 17 primers of molecular marker ISSR were tested. In vitro assays were performed using 50 Trichoderma isolates against eight FOSC isolates using the paired culture. The in vivo biocontrol assays were carried out by applying a suspension of conidia of pathogenic isolates and antagonists in the soil, around cowpea seeds, and the evaluation was carried after 45 days. The effect of 50 Trichoderma isolates on cowpea biomass was also analyzed and evaluated after 22 and 40 days after inoculation. To verify the antagonist potential of combination between AMF and Trichoderma isolates, 100 glomerospores of Gisgaspora albida and Acaulospora longula AMF isolates were used and a suspension containing 107 conidia mL-1 of T. asperelloides (URM7898) and ST2 of FOSC isolate after seed germination. In this study, 44 pathogenic isolates were obtained from plants of V. unguiculata with characteristic symptoms of Fusarium wilt. From the analysis of the sequences of amplified fragments of the TEF1 and RPB2 gene regions, it was found that the isolates are inserted in the complex of F. oxysporum species. Phylogenetic analyzes based on the combination of data of the two genes indicated the record of species F. nirenbergiae and supported the occurrence of new species belonging to the FOSC. The analysis of genetic variability among the isolates by ISSR, was found that the UBC 856 primer allowed the amplification of all products of the evaluated isolates and generated the largest number of polymorphic bands. For pathogenicity tests, most isolates were found to be pathogenic. Was verified from the in vitro assays that a reduction in the mycelial growth of all phytopathogen isolates ranging from 50% to 76.29%. Significant reductions in disease severity were also observed in most treatments, ranging from 4.62% to 43.88%. The Trichoderma isolates tested for the potential to promote plant growth of V. unguiculata promoted increases in biomass after 22 and 40 days of inoculation of the isolates, which 25.07% to 48.62%, respectively. Significant reductions in wilt symptoms were also found in trials combined effect of Trichoderma and AMF. The study reports new species of the FOSC complex associated with the culture of V. unguiculata in Brazil and demonstrates the potential for use of T. asperelloides (URM7898), G. albida (URM FMA 11) and A. longula (URM FMA 07) to control of Fusarium wilt.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biologia de FungosUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/embargoedAccessFusarium oxysporumFeijão-caupiTrichodermCaracterização e biocontrole de espécies do complexo Fusarium oxysporum oriundas de Vigna unguiculatainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALTESE Ana Cláudia Tenório do Amaral.pdfTESE Ana Cláudia Tenório do Amaral.pdfapplication/pdf3219253https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/54045/1/TESE%20Ana%20Cl%c3%a1udia%20Ten%c3%b3rio%20do%20Amaral.pdfcf8fac4f3dcc5228a7d95b4b5341b540MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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