Avaliação do perfil fenotípico de células mononucleares do sangue periférico de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana na presença de epítopos vacinais derivados do proteoma de Leishmania (Viannia) braziliensis

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: SILVA, Ailton Alvaro da
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/40972
Resumo: HERNANDES, Valéria Pereira também é conhecida em citações bibliográficas por: PEREIRA, Valéria Rego Alves. CASTRO, Maria Carolina Accioly Brelaz de, também é conhecida em citações bibliográficas por: BRELAZ-DE-CASTRO, Maria Carolina Accioly. SILVA, Rafael de Freitas e, também é conhecido em citações bibliográficas por: FREITAS-SILVA, Rafael de.
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SILVA, Rafael de Freitas e, também é conhecido em citações bibliográficas por: FREITAS-SILVA, Rafael de.As leishmanioses são um conjunto de doenças cujo agente etiológico é um protozoário do gênero Leishmania. São amplamente distribuidas nas zonas tropicais do globo, totalizando cerca de 102 países. As manifestações clínicas são divididas em: visceral (LV) e tegumentar (LT), com a LT responsável pela maioria dos casos em todo mundo. No Brasil, é a Leishmania (Viannia) braziliensis a principal espécie responsável pela LT. O tratamento da doença possui diversos fatores limitantes e a vacinação é uma promissora alternativa para o combate à doença. Um dos grandes fatores que limitam o desenvolvimento de vacinas é a escassez de antígenos capazes de ativar células e moléculas que estejam relacionados com a proteção da doença. Além disso, grande parte dos estudos se concentra em investigar modelos animais, que nem sempre refletem o que acontece em seres humanos. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi Avaliação do perfil fenotípico de células mononucleares do sangue periférico de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na presença de epítopos vacinais derivados do proteoma de L. (V.) braziliensis. Para isso, as PBMCs de 7 pacientes e 7 controles foram isoladas e estimuladas com um “pool” dos epítopos peptídicos e, por fim, marcadas com os principais marcadores fenotípicos de células T de memória (Tm) (CD45RA⁻), T Citotóxicas (T CD8⁺) e T auxiliares (T CD4⁺) e analisadas por citometria de fluxo. Os sobrenadantes foram coletados para dosagem das citocinas IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-γ. A análise estatística foi realizada empregando-se testes não paramétricos. Foi observado um perfil de subpopulações de células CD8⁺ com maior expressão de marcadores T-bet e RORɣT em pacientes com LTA, quando comparado aos indivíduos saudáveis. A expressão significativa dos marcadores T-bet e RORɣT também foi observada na população CD4⁺ em pacientes quando comparado a indivíduos saudáveis. Com relação ao perfil de células T de memória, foi observado que na população T CD8⁺ o perfil tende ao de células T de memória central (TCM), enquanto na população T CD4⁺ a tendência direciona para o perfil de T de memória efetora (TEM). Esses últimos resultados demonstram que células T CD4⁺ e T CD8⁺ desempenham diferentes papéis no momento de uma resposta imunológica voltada à memória, de modo que a população T CD4⁺ parece estar voltada a uma resposta mais efetora enquanto que a T CD8⁺ parece ter maior contribuição em uma resposta de memória em longo prazo. Além disso, a expressão de marcadores T-bet e RORɣT pelas células T CD8⁺, ainda não visto na LTA, sinaliza a necessidade de aprofundamento no estudo do papel dessas subpopulações no desenvolvimento dessa doença. Não foi observada diferença significativa entre amostras sem estímulo para as estimuladas com o “pool” de peptídeos para nenhuma população estudada. Quanto aos resultados de produção de citocinas investigadas, não foi observada produção significativa. Sendo assim, os resultados indicam que, em pacientes com LTA, os perfis TCM e TEM se apresentam em proporções diferentes em linfócitos T CD4⁺ e T CD8⁺. Esses perfis são importantes na investigação de um candidato vacinal para LTA. Esses dados fornecem uma importante contribuição para o conhecimento e combate contra a LTA.FACEPELeishmaniasis is a group of diseases whose etiologic agent is a protozoan of the genus Leishmania. They are widely distributed in tropical areas of the globe, totaling about 102 countries. The clinical manifestations are divided into: visceral and tegumentary (LT), with LT responsible for most cases worldwide. In Brazil, Leishmania (Viannia) braziliensis is the main species responsible for LT. The treatment of the disease has several limiting factors and vaccination is a promising alternative to fight the disease. One of the major factors that limit the development of vaccines is the scarcity of antigens capable of activating cells and molecules that are related to protection against disease. In addition, most of the studies focus on investigating animal models, which do not always reflect what happens in humans. In this context, the objective of this work was to evaluate the phenotypic profile of peripheral blood mononuclear cells of patients with American Cutaneous Leishmaniasis (LTA) in the presence of vaccine epitopes derived from the Leishmania (Viannia) braziliensis proteome. For this, the PBMCs of 7 patients and 7 controls were isolated and stimulated with a pool of peptide epitopes and, finally, marked with the main phenotypic markers of memory T cells (Tm) (CD45RA⁻), T Cytotoxic (T CD8⁺) and auxiliary T (CD4⁺T) and analyzed by flow cytometry. Supernatants were collected to measure cytokines IL-2, IL-4, IL-10 and IFN-γ. Were used and statistical analysis was performed using non-parametric tests. A profile of subpopulations of CD8⁺ cells with greater expression of T-bet and RORɣT markers was observed in patients with ATL, when compared to healthy individuals. The significant expression of the T-bet and RORɣT markers was also observed in the CD4⁺ population in patients when compared to healthy individuals. Regarding the profile of memory T cells, it was observed that in the CD8⁺ T population the profile tends to that of central memory T cells (TCM), while in the CD4⁺ T population the trend is towards the effector memory T profile (TEM) . These latest results demonstrate that CD4⁺ T and CD8⁺ T cells play different roles at the time of a memory-driven immune response, so that the CD4⁺ T population appears to be focused on a more effective response whereas T CD8⁺ appears to have a greater contribution to a long-term memory response. In addition, the expression of T-bet and RORɣT markers by CD8⁺ T cells, not yet seen in LTA, signals the need for further study of the role of these subpopulations in the development of this disease. There was no significant difference between samples without stimulus for those stimulated with the peptide pool for any population studied. As for the results of cytokine production investigated, no significant production was observed. Thus, the results indicate that, in patients with LTA, the TCM and TEM profiles are present in different proportions in T CD4⁺ and T CD8⁺ lymphocytes. These profiles are important in the investigation of a vaccine candidate for LTA. These data provide an important contribution to the knowledge and fight against LTA.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Inovacao TerapeuticaUFPEBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessVacinaLeishmanioseFenótiposAvaliação do perfil fenotípico de células mononucleares do sangue periférico de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana na presença de epítopos vacinais derivados do proteoma de Leishmania (Viannia) braziliensisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Ailton Alvaro da Silva.pdfDISSERTAÇÃO Ailton Alvaro da Silva.pdfapplication/pdf3980551https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/40972/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Ailton%20Alvaro%20da%20Silva.pdf7f86c0caae03fbe0572d78e431255d25MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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