Desenvolvimento de teste rápido para leishmaniose visceral canina utilizando imunossensor nanoestruturado baseado em antígenos recombinantes
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Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Tese |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/50050 |
Resumo: | A leishmaniose é um importante problema de saúde pública em pelo menos 88 países, representando uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil para seres humanos e cães. Os imunossensores são dispositivos bioanalíticos que convertem em sinal elétrico a resposta da interação antígeno-anticorpo. Comparados às técnicas imunossorológicas convencionais, os dispositivos têm como vantagem a praticidade, a possível portabilidade, o menor custo e tempo de análise. Neste projeto, foram empregadas as técnicas de voltametria cíclica e de onda quadrada para detectar a resposta da reação antígeno- anticorpo. Utilizou-se a tecnologia de eletrodos impressos (screen-printed electrodes), a qual apresenta facilidade de produção em larga escala, miniaturização e baixo custo. Visando uma maior estabilidade da matriz de imobilização do imunossensor, foram utilizadas monocamadas auto-organizadas (SAM) de alcanotiois, às quais foram ancorados nanotubos de carbono (NTCs), conferindo ao sensor um incremento na sensibilidade e consequente imobilização de biomoléculas. Utilizou-se os antígenos recombinantes rLci2B-NH6, os quais demonstraram alta especificidade quando testados em ensaios sorológicos para leishmaniose visceral (patente PI0900961-2A2BR). A matriz sensora composta pela cisteamina e NTC mostrou-se estável quando submetida a diferentes velocidades de varredura (30 a 180 mV s- 1), ocorrendo transferência de carga reversivelmente em presença de sonda redox. Além disso, quando a matriz sensora foi submetida a 20 ciclos de voltametria cíclica (na janela de potencial de -0,8 a 0,8 V e sob velocidade de varredura de 30 a 180 mV s-1), esta apresentou boa reprodutibilidade com um coeficiente de variação de 3,02%, correspondente à amplitude dos picos redox. Os resultados analíticos frente ao soro canino positivo para Leishmania infantum mostrou variação de amplitude de corrente anódica quatro vezes superior ao soro controle (soro negativo), respostas geradas pela técnica de voltametria de onda quadrada. O desenvolvimento deste imunossensor promove avanços significativos na identificação precisa do parasita nos cães, aumentando as chances de diagnóstico precoce, o que possibilita o controle da doença através da ruptura da cadeia de transmissão. |
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FERREIRA JUNIOR, Djair de Limahttp://lattes.cnpq.br/7380735002380134http://lattes.cnpq.br/3335497739195055DUTRA, Rosa Amália Fireman2023-05-10T15:59:18Z2023-05-10T15:59:18Z2017-02-07FERREIRA JUNIOR, Djair de Lima. Desenvolvimento de teste rápido para leishmaniose visceral canina utilizando imunossensor nanoestruturado baseado em antígenos recombinantes. 2017. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2017.https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/50050A leishmaniose é um importante problema de saúde pública em pelo menos 88 países, representando uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil para seres humanos e cães. Os imunossensores são dispositivos bioanalíticos que convertem em sinal elétrico a resposta da interação antígeno-anticorpo. Comparados às técnicas imunossorológicas convencionais, os dispositivos têm como vantagem a praticidade, a possível portabilidade, o menor custo e tempo de análise. Neste projeto, foram empregadas as técnicas de voltametria cíclica e de onda quadrada para detectar a resposta da reação antígeno- anticorpo. Utilizou-se a tecnologia de eletrodos impressos (screen-printed electrodes), a qual apresenta facilidade de produção em larga escala, miniaturização e baixo custo. Visando uma maior estabilidade da matriz de imobilização do imunossensor, foram utilizadas monocamadas auto-organizadas (SAM) de alcanotiois, às quais foram ancorados nanotubos de carbono (NTCs), conferindo ao sensor um incremento na sensibilidade e consequente imobilização de biomoléculas. Utilizou-se os antígenos recombinantes rLci2B-NH6, os quais demonstraram alta especificidade quando testados em ensaios sorológicos para leishmaniose visceral (patente PI0900961-2A2BR). A matriz sensora composta pela cisteamina e NTC mostrou-se estável quando submetida a diferentes velocidades de varredura (30 a 180 mV s- 1), ocorrendo transferência de carga reversivelmente em presença de sonda redox. Além disso, quando a matriz sensora foi submetida a 20 ciclos de voltametria cíclica (na janela de potencial de -0,8 a 0,8 V e sob velocidade de varredura de 30 a 180 mV s-1), esta apresentou boa reprodutibilidade com um coeficiente de variação de 3,02%, correspondente à amplitude dos picos redox. Os resultados analíticos frente ao soro canino positivo para Leishmania infantum mostrou variação de amplitude de corrente anódica quatro vezes superior ao soro controle (soro negativo), respostas geradas pela técnica de voltametria de onda quadrada. O desenvolvimento deste imunossensor promove avanços significativos na identificação precisa do parasita nos cães, aumentando as chances de diagnóstico precoce, o que possibilita o controle da doença através da ruptura da cadeia de transmissão.Leishmaniasis is an important public health problem in at least 88 countries, representing a major cause of morbidity and mortality in Brazil for humans and dogs. Immunosensors are bioanalytical devices that convert the antigen-antibody interaction response into an electrical signal. Compared with conventional immunoserological techniques, the devices have the advantage of practicality, portability, lower cost and time of analysis. In this project, the techniques of cyclic and square wave voltammetry were used to detect the response of the antigen-antibody reaction. Screen-printed electrodes (SPEs) technology, which has a large- scale production facility, miniaturization and low cost, was used. Aiming for greater stability of the immobilization matrix of the immunosensor, self-assembled monolayers (SAM) of alkanethiols were used, to which carbon nanotubes (CNTs) were anchored, giving the sensor an increase in the sensitivity and consequent immobilization of biomolecules. rLci2B-NH6 recombinant antigens were used, which demonstrated high specificity when tested in serological tests for visceral leishmaniasis (patent PI0900961-2A2BR). The sensor matrix composed of cysteamine and CNTs was stable when submitted to different scan rate (30 to 180 mV s-1), with reversible charge transfer in the presence of redox probe. In addition, when the sensor matrix was subjected to 20 cycles of cyclic voltammetry (at potential range from - 0.8 to 0.8 V and 30 to 180 mV s-1 scan rate), it presented good reproducibility with a coefficient of variation of 3.02%, corresponding to the amplitude of the redox peaks. The analytical results against the canine serum positive for Leishmania infantum showed a variation of anodic current amplitude four times higher than the control serum (negative serum), responses generated by the square wave voltammetry technique. The development of this immunosensor promotes significant advances in the precise identification of the parasite in dogs, increasing the chances of early diagnosis, which makes possible the control of the disease through the rupture of the transmission chain.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biotecnologia IndustrialUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessTeste rápidoNanossensorLeishmanionseEletroquímica - eletrodo impressoDesenvolvimento de teste rápido para leishmaniose visceral canina utilizando imunossensor nanoestruturado baseado em antígenos recombinantesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALTESE Djair De Lima Ferreira Júnior.pdfTESE Djair De Lima Ferreira Júnior.pdfapplication/pdf2149565https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/50050/1/TESE%20Djair%20De%20Lima%20Ferreira%20J%c3%banior.pdfadc9b68bda606c254d9e55edf0a2c0e5MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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