Avaliação dos efeitos da lectina WSMoL sobre alterações no transporte de Na+ e estresse oxidativo induzida por isquemia-reperfusão em células LLC-PK1
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Data de Publicação: | 2020 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/49621 |
Resumo: | A lesão renal aguda caracteriza-se pela perda funcional dos rins e está relacionada com eventos como infecção bacteriana, sepse ou processos de isquemia- reperfusão. A produção de espécies reativas do oxigênio (EROs) desempenha um papel-central nos mecanismos fisiopatológicos da LRA, e por isso, o estresse oxidativo representa um importante-alvo terapêutico. O prejuízo da função renal na LRA ocorre, em parte, porque a (Na++K+)ATPase é sensível às EROs. A WSMoL é uma lectina com ação antioxidante que é obtida do extrato aquoso de sementes Moringa oleifera. O objetivo deste trabalho foi investigar os potenciais efeitos terapêuticos da lectina WSMoL sobre as alterações funcionais induzidas pelo processo de hipóxia-reoxigenação em uma linhagem celular do túbulo proximal renal. As células LLC-PK1, que representam uma linhagem de células do túbulo proximal foram mantidas em meio 199 suplementado com 10% de soro bovino fetal (SBF), penicilina (100 U/mL) e estreptomicina (100 μg/mL) sob condições ideais (37oC; 95% de ar, 5% de CO2). A hipóxia foi induzida pela troca do meio de cultura suplementado com 10% de SBF por um meio de cultura sem SBF contendo rotenona (20 M). A reoxigenação foi efetuada pela troca desse meio por meio 199 fresco contendo glicose e 10% de SBF. Na condição de hipóxia-reoxigenação foi observado diminuição da viabilidade celular, elevação da produção de EROs, aumento da atividade da NADPH oxidase e diminuição da atividade da (Na++K+)ATPase. O tratamento das células com a WSMoL preveniu todas essas alterações induzidas pelo processo de hipóxia-reoxigenação. Os mesmos efeitos foram observados na presença da inibição da NADPH oxidase induzida pelo tratamento celular com apocinina. Esses achados demonstram que a WSMoL apresenta efeitos citoprotetores sobre células LLC-PK1 submetidas a hipóxia- reoxigenação. Esses efeitos são mediados por ações antioxidantes que envolvem a inibição da NADPH oxidase. |
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O prejuízo da função renal na LRA ocorre, em parte, porque a (Na++K+)ATPase é sensível às EROs. A WSMoL é uma lectina com ação antioxidante que é obtida do extrato aquoso de sementes Moringa oleifera. O objetivo deste trabalho foi investigar os potenciais efeitos terapêuticos da lectina WSMoL sobre as alterações funcionais induzidas pelo processo de hipóxia-reoxigenação em uma linhagem celular do túbulo proximal renal. As células LLC-PK1, que representam uma linhagem de células do túbulo proximal foram mantidas em meio 199 suplementado com 10% de soro bovino fetal (SBF), penicilina (100 U/mL) e estreptomicina (100 μg/mL) sob condições ideais (37oC; 95% de ar, 5% de CO2). A hipóxia foi induzida pela troca do meio de cultura suplementado com 10% de SBF por um meio de cultura sem SBF contendo rotenona (20 M). A reoxigenação foi efetuada pela troca desse meio por meio 199 fresco contendo glicose e 10% de SBF. 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Reactive oxygen species (ROS) plays a central role in the pathophysiological mechanisms of AKI, and for this reason, oxidative stress represents an important therapeutic target. The impairment of renal function in AKI occurs, in part, because (Na++K+)ATPase is sensitive to ROS. WSMoL is a lectin with antioxidant action that is obtained from the aqueous extract of Moringa oleifera seeds. The aim of this work was to investigate the potential therapeutic effects of WSMoL on the changes induced by the hypoxia-reoxygenation injury using renal proximal tubule cell linage. LLC-PK1 cells, which represent a cell line from the proximal tubule, were maintained in medium 199 supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), penicillin (100 U / mL) and streptomycin (100 μg/mL) under ideal conditions (37oC; 95% air, 5% CO2). Hypoxia was induced by exchanging the culture medium supplemented with 10% FBS for a culture medium without FBS but containing rotenone (20 M). Reoxygenation was performed by exchanging this medium with 199 fresh medium containing glucose and 10% FBS. In the condition of hypoxia-reoxygenation, it was observed decreased cell viability, increased ROS production, increased NADPH oxidase activity and decreased (Na++K+)ATPase activity. The treatment of cells with WSMoL prevented these alterations induced by the hypoxia-reoxygenation process. The same effects were observed in the presence of NADPH oxidase inhibition induced by apocynin. These findings demonstrate that WSMoL has cytoprotective effects on LLC-PK1 cells submitted to hypoxia-reoxygenation. These effects are mediated by antioxidant actions that involve the inhibition of NADPH oxidase.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Bioquimica e FisiologiaUFPEBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/embargoedAccessRins - DoençasCélulasLectinasAvaliação dos efeitos da lectina WSMoL sobre alterações no transporte de Na+ e estresse oxidativo induzida por isquemia-reperfusão em células LLC-PK1info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Manoel Marcelino de Lima Filho.pdfDISSERTAÇÃO Manoel Marcelino de Lima Filho.pdfapplication/pdf905897https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/49621/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Manoel%20Marcelino%20de%20Lima%20Filho.pdfd62a2cb2545fdb739a027664201053f2MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82362https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/49621/3/license.txt5e89a1613ddc8510c6576f4b23a78973MD53CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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