Purificação de lectina de folhas de Bowdichia virgilioides, interação molecular e avaliação fitoquímica e biológica do extrato salino
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Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/48092 |
Resumo: | As plantas são fontes naturais de muitas moléculas biologicamente ativas, como lectinas, que são proteínas ou glicoproteína capazes de reconhecer e se ligar a carboidratos ou glicoconjugados de maneira específica e reversível. E também é fonte de muitos outros metabólitos com alto potencial biotecnológico. Nesse sentido, o objetivo desta tese foi purificar lectina de folhas de B. virgiliodes, analisar sua interação molecular, e avaliar o extrato salino quanto a composição química e atividades biológicas. Para purificação da lectina foi preparado extrato salino das folhas, em seguida foi centrifugado, filtrado, e o sobrenadante foi dialisado e liofilizado (extrato salino). Posteriormente esse produto foi ressuspendido em água destilada e purificado em duas etapas de cromatografia de gel filtração, para obtenção da lectina. Após a purificação, foi realizado AH, inibição da AH por proteínas e carboidratos, e avaliação da interação lectina-proteína por espectroscopia de fluorescência intrínseca. Com o extrato salino foi analisado a composição química por LC-MS e avaliado sua ação antioxidante, antibacteriana, antifúngica, antibiofilme, citotóxica, hemolítica, anti-hemolítica, fotoprotetora, larvicida, e proteolítica. Por fim, foi quantificado fenóis, proteínas, carboidratos (totais e redutores) e ácido hexurônico. Os resultados apresentaram a purificação da lectina de folhas de B. virgilioides, BovLL. A qual apresentou interação com proteínas e carboidratos, em todos os ensaios avaliados. Nos ensaios com o extrato, foram identificados seis compostos majoritários e suas respectivas massas. O mesmo apresentou atividade antioxidante por DPPH, ABTS e FRAP. Atividade antibacteriana para Gram-positivas, S. pyogenes, S. aureus e E. faecalis (CMI e CMB: 250 e 500; 500 e 1000; e 1000 e 2000 μg / mL, respectivamente). Citotoxicidade em células cancerígenas (HT-29) ≥ 125 μg / mL e não para células normais (L929) até 500 μg / mL. Não apresentou toxicidade em larvas de A. salina e A. aegypti até 250 μg / mL e 1000 μg / mL, respectivamente. Não foi hemolítico até 2000 μg / mL, e foi anti-hemolítico até 1,95 μg / mL. O espectro de absorção revelou pico máximo em 280 nm (UVB) e FPS de 25,24 a 2000 μg / mL. Também apresentou 80% (U / mg) de atividade proteolítica. Finalmente foi quantificado o conteúdo de proteínas, carboidratos (totais e redutores), ácido hexurônico, e fenóis, respectivamente: 10 mg / mL, 62,85%, 17,0%, 19,18%, e 235,759 mg GAE / g. Portanto, foi purificada a primeira lectina de folhas de B. virgilioides (BovLL), com interações e biologia estudadas. E também foi obtido o extrato salino, com seis compostos químicos identificados e diferentes atividades biológicas testadas. |
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Nesse sentido, o objetivo desta tese foi purificar lectina de folhas de B. virgiliodes, analisar sua interação molecular, e avaliar o extrato salino quanto a composição química e atividades biológicas. Para purificação da lectina foi preparado extrato salino das folhas, em seguida foi centrifugado, filtrado, e o sobrenadante foi dialisado e liofilizado (extrato salino). Posteriormente esse produto foi ressuspendido em água destilada e purificado em duas etapas de cromatografia de gel filtração, para obtenção da lectina. Após a purificação, foi realizado AH, inibição da AH por proteínas e carboidratos, e avaliação da interação lectina-proteína por espectroscopia de fluorescência intrínseca. Com o extrato salino foi analisado a composição química por LC-MS e avaliado sua ação antioxidante, antibacteriana, antifúngica, antibiofilme, citotóxica, hemolítica, anti-hemolítica, fotoprotetora, larvicida, e proteolítica. 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In this sense, the objective of this thesis was to purify lectin from leaves of B. virgiliodes, analyze its molecular interaction, and evaluate its saline extract, in terms of chemical composition and biological activities. For lectin purification, a saline extract of the leaves was prepared, then it was centrifuged, filtered, and the supernatant was dialyzed and lyophilized (saline extract). Subsequently, this product was resuspended in distilled water and purified in two steps of gel filtration chromatography, to obtain the lectin. After purification, HA, inhibition of HA by proteins and carbohydrates, and evaluation of the lectin-protein interaction by intrinsic fluorescence spectroscopy were performed. With the saline extract, the chemical composition was analyzed by LC-MS and its action was evaluated: antioxidant, antibacterial, antifungal, antibiofilm, cytotoxic, hemolytic, antihemolytic, photoprotective, larvicidal and proteolytic. Finally, phenols, proteins, carbohydrates (total and reducing agents) and hexuronic acid were quantified. The results showed the purification of lectin from leaves of B. virgilioides, BovLL. Which showed interaction with proteins and carbohydrates in all assays evaluated. In the tests with the extract, six major compounds and their respective masses were identified. It showed antioxidant activity by DPPH, ABTS and FRAP. Antibacterial activity for Gram-positive, S. pyogenes, S. aureus and E. faecalis (MIC and MBC: 250 and 500; 500 and 1000; and 1000 and 2000 μg / mL, respectively). Cytotoxicity in cancer cells (HT-29) ≥ 125 μg / mL and not for normal cells (L929) up to 500 μg / mL. It did not show toxicity in A. salina and A. aegypti larvae up to 250 μg / mL and 1000 μg / mL, respectively. It was non-hemolytic up to 2000 μg / mL, and anti-hemolytic up to 1.95 μg / mL. The absorption spectrum revealed maximum peak at 280 nm (UVB) and SPF of 25.24 to 2000 μg / mL. It also showed 80% (U / mg) of proteolytic activity. Finally, the content of proteins, carbohydrates (total and reducing), hexuronic acid, and phenols was quantified, respectively: 10 mg / mL, 62.85%, 17.0%, 19.18%, and 235.759 mg GAE / g. Therefore, the first lectin from leaves of B. virgilioides (BovLL) was purified, with interactions and biology studied. And the saline extract was also obtained, with six chemical compounds identified and different biological activities tested.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Bioquimica e FisiologiaUFPEBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/embargoedAccessLectinasProteínasPlantasPurificação de lectina de folhas de Bowdichia virgilioides, interação molecular e avaliação fitoquímica e biológica do extrato salinoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPECC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/48092/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52TEXTTESE Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf.txtTESE Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf.txtExtracted texttext/plain353179https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/48092/4/TESE%20Alcides%20Jairon%20Lacerda%20Cintra.pdf.txte53257a1d24ce22759908cee09541458MD54THUMBNAILTESE Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf.jpgTESE Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1249https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/48092/5/TESE%20Alcides%20Jairon%20Lacerda%20Cintra.pdf.jpgb6d9a3f08ddcb5ad3e34a716425e121eMD55ORIGINALTESE Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdfTESE Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdfapplication/pdf4286427https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/48092/1/TESE%20Alcides%20Jairon%20Lacerda%20Cintra.pdf6dc976cdf1cafcb59d0fbf96a6a9094aMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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