Identificação polifásica e perfil de sensibilidade de isolados de Sporothrix sp. estocados na coleção de cultura URM
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Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/29457 |
Resumo: | Desde 2007, o fungo termodirmórfico Sporothrix schenckii (agente da esporotricose) não é mais considerado um táxon único, mas sim um complexo de espécies, denominado Complexo Sporothrix schenckii. O presente trabalho teve como objetivo revisar taxonomicamente agentes da esporotricose estocados na Coleção de Culturas URM, como Sporothrix schenckii, S. fungorum e Sporotrichum schenckii, além de obter o perfil de sensibilidade destes aos antifúngicos convencionais e compostos bioativos, Miltefosina e extrato de Schinus terebinthifolius (aroeira), bem como verificar o potencial inibitório de compostos de tiofeno (6CN10, LNN-03, LNN- 07, LNN-08 e LNN-09), Miltefosina e extrato de Anadenanthera macrocarpa (angico vermelho) em relação à produção de melanina dessas cepas. Testes fenotípicos de assimilação de carboidratos (Rafinose e Sacarose), morfologia de conídios, diâmetro da colônia em meio BDA e termotolerância a 37º C foram realizados. A análise genotípica baseou-se no sequenciamento parcial do gene da calmodulina e sequenciamento do gene beta-tubulina. Os testes de sensibilidade antifúngica basearam-se no método de microdiluição em caldo estabelecido pelo documento CLSI M38-A2. Para verificar a atividade dos compostos frente à produção de melanina, inóculos das cepas foram colocados em meio mínimo em ágar (Glicose 15mM, MgSO₄ 10mM, KH₂PO₄ 29,4 mM, Glicina 13mM e Tiamina 3mM) adicionado dos compostos. A análise fenotípica mostrou que dois isolados apresentam características de Sporothrix schenckii e 11 de S. mexicana, de acordo com a chave de identificação fenotípica proposta. As análises genotípicas identificaram as espécies Sporothrix schenckii, S. chilensis e S. mexicana dentre os isolados. S. schenckii, S. mexicana e S. chilensis apresentaram sensibilidade ao Itraconazol. Apenas um isolado de S. chilensis apresentou resistência à Anfotericina B. Miltefosina e o extrato de S. terebinthifolius apresentaram atividade frente a todos os isolados, com CIM´s de 0,25 a 2 μg/mL para Miltefosina, e CIM´s de 1 a 4 μg/mL para o extrato. Foi constatado que todos compostos de tiofeno testados foram capazes de inibir a produção de melanina. As ferramentas moleculares empregadas neste estudo, somadas à análise das características fenotípicas dos isolados estudados, permitiram uma identificação acurada destes, permitindo a requalificação dessas amostras da Coleção, o que representa importância no estudo da micologia no Brasil, especialmente no que diz respeito ao Complexo Sporothrix schenckii. Os resultados dos testes de sensibilidade e de inibição da produção de melanina demonstraram ação eficaz dos compostos testados, podendo estes compostos apresentarem-se como opções no tratamento da esporotricose futuramente, após estudos baseados em modelos animais, e que verifiquem a toxicidade destes. |
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VALERIANO, Carlos Alberto Tiburciohttp://lattes.cnpq.br/3776720103044684http://lattes.cnpq.br/9993875563206244LIMA NETO, Reginaldo Gonçalves deOLIVEIRA, Manoel Marques Evangelista de2019-02-25T23:21:52Z2019-02-25T23:21:52Z2017-02-24https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/29457Desde 2007, o fungo termodirmórfico Sporothrix schenckii (agente da esporotricose) não é mais considerado um táxon único, mas sim um complexo de espécies, denominado Complexo Sporothrix schenckii. O presente trabalho teve como objetivo revisar taxonomicamente agentes da esporotricose estocados na Coleção de Culturas URM, como Sporothrix schenckii, S. fungorum e Sporotrichum schenckii, além de obter o perfil de sensibilidade destes aos antifúngicos convencionais e compostos bioativos, Miltefosina e extrato de Schinus terebinthifolius (aroeira), bem como verificar o potencial inibitório de compostos de tiofeno (6CN10, LNN-03, LNN- 07, LNN-08 e LNN-09), Miltefosina e extrato de Anadenanthera macrocarpa (angico vermelho) em relação à produção de melanina dessas cepas. Testes fenotípicos de assimilação de carboidratos (Rafinose e Sacarose), morfologia de conídios, diâmetro da colônia em meio BDA e termotolerância a 37º C foram realizados. A análise genotípica baseou-se no sequenciamento parcial do gene da calmodulina e sequenciamento do gene beta-tubulina. Os testes de sensibilidade antifúngica basearam-se no método de microdiluição em caldo estabelecido pelo documento CLSI M38-A2. Para verificar a atividade dos compostos frente à produção de melanina, inóculos das cepas foram colocados em meio mínimo em ágar (Glicose 15mM, MgSO₄ 10mM, KH₂PO₄ 29,4 mM, Glicina 13mM e Tiamina 3mM) adicionado dos compostos. A análise fenotípica mostrou que dois isolados apresentam características de Sporothrix schenckii e 11 de S. mexicana, de acordo com a chave de identificação fenotípica proposta. As análises genotípicas identificaram as espécies Sporothrix schenckii, S. chilensis e S. mexicana dentre os isolados. S. schenckii, S. mexicana e S. chilensis apresentaram sensibilidade ao Itraconazol. Apenas um isolado de S. chilensis apresentou resistência à Anfotericina B. Miltefosina e o extrato de S. terebinthifolius apresentaram atividade frente a todos os isolados, com CIM´s de 0,25 a 2 μg/mL para Miltefosina, e CIM´s de 1 a 4 μg/mL para o extrato. Foi constatado que todos compostos de tiofeno testados foram capazes de inibir a produção de melanina. 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This work, aimed to perform a taxonomic review of sporotrichosis agents strains, stored in the University of Recife Micology Culture Collection, as Sporothrix schenckii, S. fungorum and Sporotrichum schenckii, besides obtain the susceptibility profile of this isolates to conventional antifungals, and bioactive compounds, Miltefosine and a plant extract (Schinus terebinthifolius) as well verify the inhibitory potential of tiophen compounds (6CN10, LNN-03, LNN-07, LNN-08 e LNN-09), Miltefosine and a natural extract (Anadenanthera macrocarpa) against the melanin production of these strains. Phenotypicall tests of carbohydrates assimilation (Raffinose and Sucrose), conidia morphology, colony diameter in PDA medium and thermotolerancy in 37º C was performed. Genotypic analysis was based in the partial sequencing of the calmodulin gene and sequencing of the beta-tubulin gene. The susceptibility trials was based in the microbroth dilution method established by the CLSI M38-A2 document. To verify the activity of the compounds against the melanin production, strains inoculum was put down in minimal medium in agar (Glicose 15mM, MgSO₄ 10mM, KH₂PO₄ 29,4 mM, Glicin 13mM and Tiamin 3mM) added of compounds. The phenotypic analysis showed that two isolates shows Sporothrix schenckii features and 11 S. Mexicana features, according the key phenotypic features proposed. Genotypic analysis identify the species Sporothrix schenckii, S. chilensis and S. mexicana among the isolates. S. schenckii, S. mexicana and S. chilensis shows susceptibility to Itraconazole. One S. chilensis isolate shows resistance to Amphotericin B. Miltefosine and S. terebinthifolius extract shows activity against all the isolates, with MIC´s of 0,25 to 2 μg/mL to Miltefosine, and MIC´s of 1 to 4 μg/mL to the extract. Was verified that all the tiophene compounds tested was capable to inhibit the melanin production. The molecular tools applied in this work, added to the phenotypic features analysis of the studied isolates, allowed an accurate identification of these, has permitted the requalification of these Collection samples, what represents importance in the mycology study in Brazil, specially regard to the Sporothrix schenckii Complex. Results of the susceptibility tests and melanin inhibition showed effective action of the tested compounds, and these compounds may be options in the sporotrichosis treatment in the future, after studies based in murine models, and that verify the toxicity of these.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biologia de FungosUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessFungos filamentososEsporotricoseIdentificação polifásica e perfil de sensibilidade de isolados de Sporothrix sp. estocados na coleção de cultura URMinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Carlos Alberto Tiburcio Valeriano.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Carlos Alberto Tiburcio Valeriano.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1156https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/29457/6/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Carlos%20Alberto%20Tiburcio%20Valeriano.pdf.jpgcc24465d16c0edef410e1a9fea2bddf7MD56ORIGINALDISSERTAÇÃO Carlos Alberto Tiburcio Valeriano.pdfDISSERTAÇÃO Carlos Alberto Tiburcio Valeriano.pdfapplication/pdf587652https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/29457/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Carlos%20Alberto%20Tiburcio%20Valeriano.pdf119e611e6ead88042d0232ce25c4ec67MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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Desde 2007, o fungo termodirmórfico Sporothrix schenckii (agente da esporotricose) não é mais considerado um táxon único, mas sim um complexo de espécies, denominado Complexo Sporothrix schenckii. O presente trabalho teve como objetivo revisar taxonomicamente agentes da esporotricose estocados na Coleção de Culturas URM, como Sporothrix schenckii, S. fungorum e Sporotrichum schenckii, além de obter o perfil de sensibilidade destes aos antifúngicos convencionais e compostos bioativos, Miltefosina e extrato de Schinus terebinthifolius (aroeira), bem como verificar o potencial inibitório de compostos de tiofeno (6CN10, LNN-03, LNN- 07, LNN-08 e LNN-09), Miltefosina e extrato de Anadenanthera macrocarpa (angico vermelho) em relação à produção de melanina dessas cepas. Testes fenotípicos de assimilação de carboidratos (Rafinose e Sacarose), morfologia de conídios, diâmetro da colônia em meio BDA e termotolerância a 37º C foram realizados. A análise genotípica baseou-se no sequenciamento parcial do gene da calmodulina e sequenciamento do gene beta-tubulina. Os testes de sensibilidade antifúngica basearam-se no método de microdiluição em caldo estabelecido pelo documento CLSI M38-A2. Para verificar a atividade dos compostos frente à produção de melanina, inóculos das cepas foram colocados em meio mínimo em ágar (Glicose 15mM, MgSO₄ 10mM, KH₂PO₄ 29,4 mM, Glicina 13mM e Tiamina 3mM) adicionado dos compostos. A análise fenotípica mostrou que dois isolados apresentam características de Sporothrix schenckii e 11 de S. mexicana, de acordo com a chave de identificação fenotípica proposta. As análises genotípicas identificaram as espécies Sporothrix schenckii, S. chilensis e S. mexicana dentre os isolados. S. schenckii, S. mexicana e S. chilensis apresentaram sensibilidade ao Itraconazol. Apenas um isolado de S. chilensis apresentou resistência à Anfotericina B. Miltefosina e o extrato de S. terebinthifolius apresentaram atividade frente a todos os isolados, com CIM´s de 0,25 a 2 μg/mL para Miltefosina, e CIM´s de 1 a 4 μg/mL para o extrato. Foi constatado que todos compostos de tiofeno testados foram capazes de inibir a produção de melanina. As ferramentas moleculares empregadas neste estudo, somadas à análise das características fenotípicas dos isolados estudados, permitiram uma identificação acurada destes, permitindo a requalificação dessas amostras da Coleção, o que representa importância no estudo da micologia no Brasil, especialmente no que diz respeito ao Complexo Sporothrix schenckii. Os resultados dos testes de sensibilidade e de inibição da produção de melanina demonstraram ação eficaz dos compostos testados, podendo estes compostos apresentarem-se como opções no tratamento da esporotricose futuramente, após estudos baseados em modelos animais, e que verifiquem a toxicidade destes. |
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