Purificação bioguiada e caracterização química de compostos ativos de folhas Anadenanthera colubrina var. Cebil. (Griseb.) Altschul

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: ARAÚJO, Daniel Rodrigo Cavalcante de
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/34570
Resumo: A espécie Anadenanthera colubrina var. Cebil (Griseb.) Altschul é uma árvore com ocorreência na caatinga, cerrado e mata atlântica, sendo conhecida como Angico, ela é usada tradicionalmente para tratar doenças respiratórias. A abordagem etnodirigida foi o critério de escolha desta espécie, e por isso o objetivo deste trabalho foi o de estudar o potencial terapêutico das folhas e os principais compostos secundários encontrados neste tecido. Para isso foram usados técnicas in vitro para verificar o potencial antimicrobiano, antioxidante e citotóxico dos extratos, seguido de atividades de isolamento bioguiado de compostos ativos. No primeiro momento foi feita uma extração fracionada com solventes orgânicos em ordem crescente de polaridade com o material vegetal do período seco e chuvoso. Todos os extratos apresentaram atividade antimicrobiana sendo o mais promissor o extrato acetato de etila (AcEOEt) de folhas e frutos (EALE e EAFE), ambos do período chuvoso (3), por exemplo, o extrato EALE3 apresentou concentração inibitória mínima (CIM) de 0,195; 0,390; 0,781 e 0,390 mg/mL e o extrato EAFE3 apresentou CIM de 0,097; 0,390; 0,195 e 0,195 mg/mL frente as bactérias gram-positivas Staphylococcus aureus UFPEDA 02, S. aureus UFPEDA 733, S. aureus UFPEDA 709 e Bacillus subtilis UFPEDA 86 respectivamente. Já os resultados frente a bactérias gram-negativas os melhores resultados também foram visualizados em EALE3 e EAFE3 com CIM de 0,390 mg/mL e 0,195 mg/mL frente a Escherichia coli. Foi realizado o isolamento bioguiado dos compostos no extrato AcOEt usando a cromatografia flash (Biotage Isolera one) onde foram obtidas cinco frações, sendo as frações F2 e F4 mais ativas, ambas com CIM de 0,019 mg/mL para S. aureus UFPEDA 02, já na análise de sequestro de DPPH, a fração F4 foi mais significativa com IC50 de 133 ± 9 μg/mL. Essas frações foram encaminhadas ao sistema de purificação (CLAE-EM preparativa) onde foram isolados os componentes principais e foi constatado por RMN que a fração F2 tem como componente principal o ácido p-hidroxibenzóico m/z 137 [M+H]⁻ e na fração F4 o componente principal é o hiperosídeo m/z 487 [M+H]⁺. Ambos apresentam atividade anti- Staphylococcus aureus com CIM de 0,5 mg/mL e 0,25 mg/mL respectivamente, e anti-formação de biofilme de Staphylococcus aureus em concentrações subinibitórias (0,1 mg/mL). Nossos resultados colaboram com estudos que apontam um efeito positivo da pluviosidade no efeito de extratos de plantas e associam esta atividade com o maior conteúdo de derivados de quercetina em amostras do período chuvoso. Os componentes principais foram isolados e testados e nossos resultados estão de acordo com os achados na literatura quanto ao seu potencial biotecnológico.
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No primeiro momento foi feita uma extração fracionada com solventes orgânicos em ordem crescente de polaridade com o material vegetal do período seco e chuvoso. Todos os extratos apresentaram atividade antimicrobiana sendo o mais promissor o extrato acetato de etila (AcEOEt) de folhas e frutos (EALE e EAFE), ambos do período chuvoso (3), por exemplo, o extrato EALE3 apresentou concentração inibitória mínima (CIM) de 0,195; 0,390; 0,781 e 0,390 mg/mL e o extrato EAFE3 apresentou CIM de 0,097; 0,390; 0,195 e 0,195 mg/mL frente as bactérias gram-positivas Staphylococcus aureus UFPEDA 02, S. aureus UFPEDA 733, S. aureus UFPEDA 709 e Bacillus subtilis UFPEDA 86 respectivamente. Já os resultados frente a bactérias gram-negativas os melhores resultados também foram visualizados em EALE3 e EAFE3 com CIM de 0,390 mg/mL e 0,195 mg/mL frente a Escherichia coli. Foi realizado o isolamento bioguiado dos compostos no extrato AcOEt usando a cromatografia flash (Biotage Isolera one) onde foram obtidas cinco frações, sendo as frações F2 e F4 mais ativas, ambas com CIM de 0,019 mg/mL para S. aureus UFPEDA 02, já na análise de sequestro de DPPH, a fração F4 foi mais significativa com IC50 de 133 ± 9 μg/mL. Essas frações foram encaminhadas ao sistema de purificação (CLAE-EM preparativa) onde foram isolados os componentes principais e foi constatado por RMN que a fração F2 tem como componente principal o ácido p-hidroxibenzóico m/z 137 [M+H]⁻ e na fração F4 o componente principal é o hiperosídeo m/z 487 [M+H]⁺. Ambos apresentam atividade anti- Staphylococcus aureus com CIM de 0,5 mg/mL e 0,25 mg/mL respectivamente, e anti-formação de biofilme de Staphylococcus aureus em concentrações subinibitórias (0,1 mg/mL). Nossos resultados colaboram com estudos que apontam um efeito positivo da pluviosidade no efeito de extratos de plantas e associam esta atividade com o maior conteúdo de derivados de quercetina em amostras do período chuvoso. Os componentes principais foram isolados e testados e nossos resultados estão de acordo com os achados na literatura quanto ao seu potencial biotecnológico.CNPqFACEPEAnadenanthera colubrina var. cebil (Griseb.) Altschul is a common tree native to the Caatinga, Cerrado and Atlantic Rainforest biomes. It is popularly known as Angico and traditionally used as tinctures to treat respiratory diseases. We chose this species following an ethnodirected approach with the objective of studying the therapeutic potential of leaves and their secondary compounds. The antimicrobial, antioxidant and cytotoxic potential of extracts were examined through in vitro techniques. The active compounds were then isolated by analytic techniques. A fractioned extraction was completed using organic solvents of increasing polarity over plant material from dry and wet seasons. All of these extracts showed antimicrobial activity but the most promising was the ethyl-acetate extract of leaves and fruits (EALE and EAFE) from wet season (3). For example, EALE3 extract had a minimum inhibitory concentration (MIC) of 0.195; 0.390; 0.781 and 0.390 mg/mL and EAFE3 extract had MIC values of 0.097; 0.390; 0.195 and 0.195 mg/mL against gram-positive bacteria Staphylococcus aureus UFPEDA 02, S. aureus UFPEDA733, S. aureus UFPEDA 709 and Bacillus subtilis UFPEDA 86, respectively. The best results against gram-negative bacteria were also observed in EALE3 and EAFE3 with MIC values of 0.390 mg/mL and 0.195 mg/mL on Escherichia coli. Thin layer chromatography identified abundant flavonoids and proanthocyanidins in leaves and fruits. Five different fractions were obtained from ethyl-acetate extracts through flash chromatography (Biotage Isolera One). Fractions F2 and F4 were the most active only against S. aureus UFPEDA 02, both with MIC values of 0.019 mg/mL. The DPPH scavenging analysis showed that F4 fraction was the most significant with IC50 of 133  9 μg/mL. These fractions were sent to the purification system (preparative HPLC-MS) to isolate main compounds. The NMR was then used to corroborate that main compound for F2 fraction was p-hydroxibenzoic acid with a [M+H]⁻ value of m/z 137 and main compound for F4 fraction was quercetin-3-O-ß-galactopyranose (hyperoside) with [M+H]⁻ value of m/z 487. Both compounds showed anti- Staphylococcus aureus activity with MIC of 0.5 mg/mL and 0.25 mg/mL, respectively. They also showed anti- biofilm formation for Staphylococcus aureus in sub-inhibitory concentrations (0.1 mg/mL) besides antioxidant activity for in vitro conditions. Our results agreed with other studies that pointed out the positive effect of pluviosity on plant extracts effectiveness and associate this activity to a higher concentration of glycosylated quercetin compounds from wet season samples. Our results were also in agreement with those found on literature regarding biotechnological potential of isolated main compounds.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Ciencias BiologicasUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessPlantas medicinaisMatéria médica vegetalAgentes antiinfecciososPurificação bioguiada e caracterização química de compostos ativos de folhas Anadenanthera colubrina var. Cebil. (Griseb.) Altschulinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILTESE Daniel Rodrigo Cavalcante de Araújo.pdf.jpgTESE Daniel Rodrigo Cavalcante de Araújo.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1215https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/34570/5/TESE%20Daniel%20Rodrigo%20Cavalcante%20de%20Ara%c3%bajo.pdf.jpge622cb48fa8a09cbf6da5adb839a62bbMD55ORIGINALTESE Daniel Rodrigo Cavalcante de Araújo.pdfTESE Daniel Rodrigo Cavalcante de Araújo.pdfapplication/pdf9567618https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/34570/1/TESE%20Daniel%20Rodrigo%20Cavalcante%20de%20Ara%c3%bajo.pdff700c7facd41dd5755bad1b1640ecc23MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/34570/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82310https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/34570/3/license.txtbd573a5ca8288eb7272482765f819534MD53TEXTTESE Daniel Rodrigo Cavalcante de Araújo.pdf.txtTESE Daniel Rodrigo Cavalcante de Araújo.pdf.txtExtracted texttext/plain127124https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/34570/4/TESE%20Daniel%20Rodrigo%20Cavalcante%20de%20Ara%c3%bajo.pdf.txt775d0ef0ad466c926dcc95d891e812e2MD54123456789/345702019-10-26 04:22:14.267oai:repositorio.ufpe.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212019-10-26T07:22:14Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false
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