Análise de expressão de fatores envolvidos na síntese de proteínas durante o ciclo de vida de Leishmania sp.
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Data de Publicação: | 2006 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/6588 |
Resumo: | Em eucariotos, a etapa crítica de iniciação da síntese protéica é aquela mais sujeita a mecanismos de de regulação. Esta etapa requer a participação de um conjunto de fatores de iniciação de tradução (eIFs), além de subunidades ribossomais. Entre os eIFs se destaca o complexo eIF4F, composto pelas subunidades eIF4FA, eIF4FE e eIF4FG. Em Leishmania, o controle da síntese das proteínas é essencial para a regulação da expressão gênica, mas tem sido pouco estudada. Neste patógeno, múltiplos homólogos para a subunidade do complexo eIF4FEforam identificados e tiveram sua expressão quantificada na forma promastigota (pm) do seu ciclo de vida. Neste trabalho, iniciou-se o estudo em Leishmania de um homólogo da proteína ribossomal P0, componente da subunidade 60S. A partir da clonagem de seu gene, expressão em Escherichia coli e produção de soro policlonal específico partiu-se para a quantificação de seus níveis intracelulares na forma pm, que se mostraram elevados (6,6x10e5 moléculas/células) e superiores para os observados para os homólogos de eIF4F. Em seguida, visando a analisar sua expressão durante o ciclo de vida do parasita, otimizou-se as condições de crescimentode espécies representativas de Leishmania nas suas formas promastigos metacíclica (pm-mt) e amastigota (am). Buscou-se então a detecção de proteínas de expressão estágio-específicas (A2 - am; META1 - pm-mt) para validar as curvas de crescimento, mas apenas a expressão de META1 foi confirmada, embora a forma Am tenha sido confirmada por microscopia. A expressão da proteína P0 mostrou-se constante nessas várias formas celulares. Em comparação, a expressão de um homólogo da proteína eIF4G, LmeIF4G3, também se mostrou contante, enquanto que um segundo homólogo, LmeIF4G1, só foi detectado nas formas am e pmdo parasita. Ensaios com outors homólogos de eIF4F estão sendo realizados, esperando-se caracterizar melhor os processos que envolvem a iniciação da tradução em Leishmania e o controle de sua diferenciação celular |
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Neste patógeno, múltiplos homólogos para a subunidade do complexo eIF4FEforam identificados e tiveram sua expressão quantificada na forma promastigota (pm) do seu ciclo de vida. Neste trabalho, iniciou-se o estudo em Leishmania de um homólogo da proteína ribossomal P0, componente da subunidade 60S. A partir da clonagem de seu gene, expressão em Escherichia coli e produção de soro policlonal específico partiu-se para a quantificação de seus níveis intracelulares na forma pm, que se mostraram elevados (6,6x10e5 moléculas/células) e superiores para os observados para os homólogos de eIF4F. Em seguida, visando a analisar sua expressão durante o ciclo de vida do parasita, otimizou-se as condições de crescimentode espécies representativas de Leishmania nas suas formas promastigos metacíclica (pm-mt) e amastigota (am). 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Ensaios com outors homólogos de eIF4F estão sendo realizados, esperando-se caracterizar melhor os processos que envolvem a iniciação da tradução em Leishmania e o controle de sua diferenciação celularporUniversidade Federal de PernambucoAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessFatores de iniciaçãoLeishmaniaSíntese protéicaAnálise de expressão de fatores envolvidos na síntese de proteínas durante o ciclo de vida de Leishmania sp.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALarquivo6288_1.pdfapplication/pdf2921977https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/6588/1/arquivo6288_1.pdf99e4e2f0b07d7e3f569432b1a3b747afMD51LICENSElicense.txttext/plain1748https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/6588/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52TEXTarquivo6288_1.pdf.txtarquivo6288_1.pdf.txtExtracted texttext/plain169867https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/6588/3/arquivo6288_1.pdf.txt3bd36f2e5de6ab5c7bf146ce0963f3acMD53THUMBNAILarquivo6288_1.pdf.jpgarquivo6288_1.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1515https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/6588/4/arquivo6288_1.pdf.jpg14413f0d15e653974d1b4699fe7a613bMD54123456789/65882019-10-25 02:31:01.921oai:repositorio.ufpe.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212019-10-25T05:31:01Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false |
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