Detecção de resistência as Equinocandinas de Isolados Clínicos de Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis através de Espectrometria de massas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: ROBERTO, Ana Emília de Medeiros
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
dARK ID: ark:/64986/001300000rs7v
Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/25070
Resumo: ROBERTO, Ana Emília de Medeiros, também é conhecida em citações bibliográficas por: MEDEIROS, A. E. R.
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spelling ROBERTO, Ana Emília de Medeiroshttp://lattes.cnpq.br/3142999410597162http://lattes.cnpq.br/9993875563206244LIMA NETO, Reginaldo Gonçalves deNEVES, Rejane Pereira2018-07-13T22:51:42Z2018-07-13T22:51:42Z2016-03-01https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/25070ark:/64986/001300000rs7vROBERTO, Ana Emília de Medeiros, também é conhecida em citações bibliográficas por: MEDEIROS, A. E. R.Observa-se um contínuo aumento na resistência de espécies de Candida aos antifúngicos disponíveis. Faz-se necessário que o diagnóstico seja oportuno e verossímil, associado à indicação terapêutica que é corretamente direcionada a partir de testes de sensibilidade antifúngica in vitro. A utilização da espectrometria de massas através da técnica de Matrix Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) que reduz o tempo de diagnóstico em comparação com métodos de rotina já é uma realidade, contudo estudos apontam a capacidade dessa metodologia em identificar cepas resistentes pela detecção de mudanças mínimas no perfil proteíco da cepa após exposição ao fármaco. Assim, objetivou-se diagnosticar, em pacientes internados em UTI, isolados clínicos do complexo Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis) através da técnica proteômica Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) e correlacionar sua sensibilidade/resistência às equinocandinas com mudanças no espectro protéico. Trata-se de uma pesquisa experimental analítica com abordagem qualitativa. Amostras sanguíneas venosas foram coletadas entre agosto de 2014 e julho de 2015, a partir de pacientes internados em UTI, foram observadas ao exame direto e colhidas em frascos de hemocultura. As leveduras isoladas foram identificadas por MALDI-TOF MS e testes de sensibilidade antifúngica foram realizados através do CLSI frente a anidulafungina, caspofungina e micafungina. A detecção na resistência através da mudança mínima do plano espectral protéico obtida no MALDI-TOF MS, foi possível após o cruzamento de cada concentração do espectro com uma das duas concentrações extremas, máxima ou nula, onde formou-se uma matriz a partir do Índice de Correlação do Composto (ICC) utilizado para gerar mapas de calor. Foram diagnosticados 44 casos de candidemia, sendo 26 por Candida parapsilosis, dez C. albicans, dois casos por C. metapsilosis, dois C. orthopsilosis, dois por C. tropicalis, um C. haemulonii e um Candida sp. Vinte e oito (93,2%) isolados do complexo Candida parapsilosis foram sensíveis as equinocandinas de acordo com CLSI e 24 (79,9%) foram sensíveis de acordo com MALDI-TOF. A Concentração Inibitória Mínima e a Mudança Mínima no Perfil Protéico obtidos através do CLSI e MALDI-TOF, apresentaram concordância de 91,6%, 96,6% e 98,3% para anidulafungina, caspofungina e micafungina, respectivamente, frente os isolados de Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS é capaz de determinar o breakpoint de uma levedura clínica após 15 horas de exposição ao antifúngico e permite predizer a melhor escolha antifúngica para pacientes críticos com candidemia.CAPESRecently, there is an increase in resistance of Candida species to antifungal drugs available. It is necessary that the diagnosis is timely and credible associated with therapeutic indication that is directed from in vitro antifungal susceptibility testing. The use of mass spectrometry through the technique of Matrix Assisted Laser Desorption / Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS), which reduces the time of diagnosis as compared to routine methods is already a reality, however pointed studies this methodology can identify resistant strains by detecting minimal changes in protein profile of strain after exposure. Thus, the objective was to diagnose in ICU patients, clinical isolates of complex Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis) through proteomic technique Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) and correlate their sensitivity/resistance to echinocandins with changes in the protein spectrum. It is an analytical experimental research with qualitative approach. Venous blood samples were collected between August 2014 and July 2015, from ICU patients were observed in the direct examination and harvested in blood culture bottles. The yeasts were identified by MALDI-TOF MS and sensitivity tests were performed using CLSI antifungal and MALDI-TOF MS, compared to anidulafungin, caspofungin and micafungin. After crossing every spectrum concentration with one of the two extreme concentrations, maximum or zero, formed the matrix of Compound Correlation Index (ICC) used to generate heat maps. 44 cases of candidemia were diagnosed, 26 by Candida parapsilosis ten C. albicans, two cases of C. metapsilosis two C. orthopsilosis two by C. tropicalis, a C. haemulonii and one case of Candida sp. Twenty-eight (93.2%) isolates of Candida parapsilosis complex echinocandins according to CLSI and 24 were sensitive (79.9%) were sensitive according to MALDI-TOF. The Minimum Inhibitory Concentration and Minimum Change in Protein Profile obtained by CLSI and MALDI-TOF showed concordance of 91.6%, 96.6% and 98.3% for anidulafungin, caspofungin and micafungin, respectively, compared isolates Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS is able to determine the breakpoint of a clinical yeast after 15 hours of exposure to antifungal and allows predicting the best antifungal choice for critically ill patients with candidemiaporUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biologia de FungosUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessMicologia médicaAntimicóticosEquinocandinasDetecção de resistência as Equinocandinas de Isolados Clínicos de Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis através de Espectrometria de massasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1179https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/25070/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Ana%20Em%c3%adlia%20de%20Medeiros%20Roberto.pdf.jpg927349e3286e24db9223126d2dd28f9eMD55ORIGINALDISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdfDISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdfapplication/pdf2427887https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/25070/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Ana%20Em%c3%adlia%20de%20Medeiros%20Roberto.pdf98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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