Avaliação histopatológica e determinação da expressão da proteína surfactante tipo-b (SP-B) no pulmão de ratos sépticos tratados com ceftriaxone e antioxidantes
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Data de Publicação: | 2024 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/55171 |
Resumo: | A sepse é um conjunto de manifestações decorrente de infecções que acometem o organismo, sendo potencialmente fatal ou que pode desencadear o surgimento da lesão pulmonar aguda (LPA), visto que os pulmões são um dos órgãos mais comumente atingindo. Avaliar histomorfometricamente e determinar a expressão da proteína surfactante tipo-b (SP-B) nos pulmões de ratos Wistar sépticos tratados com ceftriaxone e/ou antioxidantes. Foram utilizados 42 ratos Wistar machos (200-350g), para compor sete grupos experimentais (n=6/grupo). Desses, 24 foram submetidos a CLP e tratados com: I) ceftriaxona (30 mg/kg) - ATB; II) Vit C 50mg/kg + NAC 10mg/kg + Vit E 20mg/kg - ATO; III) ATO+ATB; IV) CLP (água para injeção 5 ml/kg). O grupo SHAM (controle) foi composto por três grupos (n=6/grupo), que passaram pelo mesmo procedimento cirúrgico sem a indução de sepse e foram tratados da mesma forma que CLP: I) SHAM; II) SHAM+ATB; III) SHAM+ATB+ATO. Decorrido 24h do procedimento, os animais receberam o tratamento durante cinco dias consecutivos. Durante esse período os animais foram observados quanto as características fisiológicas e ao final foram anestesiados para determinar o perfil hematológico, e posteriormente coleta do lóbulo pulmonar para avaliação histológica, histomorfométrica e expressão da proteína SP-B por Western Blot. O protocolo experimental foi aprovado pela CEUA-UFPE no 23076.027592/2017-85. O percentual de mortalidade experimental nos grupos séptico foi de 21,42% o que permitiu estruturar grupos de n=6/grupo. O índice de sobrevivência dos grupos sépticos (CLP) variaram significativamente (p<0,05) de acordo com o tipo de tratamento e o tempo, onde em 48h o grupo tratado com antibiótico obteve maior índice de mortalidade (34%). Quanto as condições fisiológicas observadas (mobilidade, letargia e diarreia) e perfil hematológico, os tratados com ATO ou ATB+ATO não apresentam diferença significativa (p<0,05) comparado ao SHAM. Na histologia e morfometria, constatou-se que os grupos tratados com ATO+ATB ou ATO isoladamente apresentaram melhores resultados quanto a preservação do parênquima pulmonar, verificando septos delicados, maior quantidade de pneumócitos tipo II e menor infiltração de células inflamatórias. Não foi verificada diferença significativa nestes tratamentos ao se comparar com o grupo SHAM referente a quantidade de macrófago, linfócitos, neutrófilos, pneumócitos e na espessura de septos. A quantificação de SP-B apresentou-se significativamente aumentada no grupo CLP comparado aos demais grupos. Por sua vez, a expressão de SP-B nos grupos tratados com ATO, ATB ou associação dos dois mostraram-se semelhante àquela verificada no grupo SHAM. Os protocolos que continham antioxidante direcionados ao tratamento da lesão pulmonar aguda, decorrente da sepse, foram mais eficazes e verificou-se que a SP-B quando quantificada na fase aguda da lesão, pode ser um importante marcador da progressão da doença. |
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Avaliar histomorfometricamente e determinar a expressão da proteína surfactante tipo-b (SP-B) nos pulmões de ratos Wistar sépticos tratados com ceftriaxone e/ou antioxidantes. Foram utilizados 42 ratos Wistar machos (200-350g), para compor sete grupos experimentais (n=6/grupo). Desses, 24 foram submetidos a CLP e tratados com: I) ceftriaxona (30 mg/kg) - ATB; II) Vit C 50mg/kg + NAC 10mg/kg + Vit E 20mg/kg - ATO; III) ATO+ATB; IV) CLP (água para injeção 5 ml/kg). O grupo SHAM (controle) foi composto por três grupos (n=6/grupo), que passaram pelo mesmo procedimento cirúrgico sem a indução de sepse e foram tratados da mesma forma que CLP: I) SHAM; II) SHAM+ATB; III) SHAM+ATB+ATO. Decorrido 24h do procedimento, os animais receberam o tratamento durante cinco dias consecutivos. Durante esse período os animais foram observados quanto as características fisiológicas e ao final foram anestesiados para determinar o perfil hematológico, e posteriormente coleta do lóbulo pulmonar para avaliação histológica, histomorfométrica e expressão da proteína SP-B por Western Blot. O protocolo experimental foi aprovado pela CEUA-UFPE no 23076.027592/2017-85. O percentual de mortalidade experimental nos grupos séptico foi de 21,42% o que permitiu estruturar grupos de n=6/grupo. O índice de sobrevivência dos grupos sépticos (CLP) variaram significativamente (p<0,05) de acordo com o tipo de tratamento e o tempo, onde em 48h o grupo tratado com antibiótico obteve maior índice de mortalidade (34%). Quanto as condições fisiológicas observadas (mobilidade, letargia e diarreia) e perfil hematológico, os tratados com ATO ou ATB+ATO não apresentam diferença significativa (p<0,05) comparado ao SHAM. Na histologia e morfometria, constatou-se que os grupos tratados com ATO+ATB ou ATO isoladamente apresentaram melhores resultados quanto a preservação do parênquima pulmonar, verificando septos delicados, maior quantidade de pneumócitos tipo II e menor infiltração de células inflamatórias. Não foi verificada diferença significativa nestes tratamentos ao se comparar com o grupo SHAM referente a quantidade de macrófago, linfócitos, neutrófilos, pneumócitos e na espessura de septos. A quantificação de SP-B apresentou-se significativamente aumentada no grupo CLP comparado aos demais grupos. Por sua vez, a expressão de SP-B nos grupos tratados com ATO, ATB ou associação dos dois mostraram-se semelhante àquela verificada no grupo SHAM. Os protocolos que continham antioxidante direcionados ao tratamento da lesão pulmonar aguda, decorrente da sepse, foram mais eficazes e verificou-se que a SP-B quando quantificada na fase aguda da lesão, pode ser um importante marcador da progressão da doença.CAPESSepsis is a set of manifestations resulting from infections that affect the body, being potentially fatal or which can trigger the emergence of acute lung injury (ALI), since the lungs are one of the most commonly affected organs. To evaluate histomorphometrically and determine the expression of surfactant protein type-b (SP- B) in the lungs of septic Wistar rats treated with ceftriaxone and/or antioxidants. 42 male Wistar rats (200-350g) were used to form seven experimental groups (n=6/group). Of these, 24 underwent CLP and treated with: I) ceftriaxone (30 mg/kg) - ATB; II) Vit C 50mg/kg + NAC 10mg/kg + Vit E 20mg/kg - ATO; III) ATO+ATB; IV) CLP (water for injection 5 ml/kg). The SHAM group (control) was composed of three groups (n=6/group), which underwent the same surgical procedure without inducing sepsis and were treated in the same way as CLP: I) SHAM; II) SHAM+ATB; III) SHAM+ATB+ATO. After 24 hours of the procedure, the animals received the treatment for five consecutive days. During this period, the animals were observed for physiological characteristics and at the end they were anesthetized to determine the hematological profile, and subsequently the lung lobe was collected for histological, histomorphometric and SP-B protein expression evaluation by Western Blot. The experimental protocol was approved by CEUA-UFPE no 23076.027592/2017-85. Results: The percentage of experimental mortality in the septic groups was 21.42%, which allowed structuring groups of n=6/group. The survival rate of septic groups (CLP) varied significantly (p<0.05) according to the type of treatment and time, where in 48 hours the group treated with antibiotics had a higher mortality rate (34%). Regarding the physiological conditions observed (mobility, lethargy and diarrhea) and hematological profile, those treated with ATO or ATB+ATO did not show a significant difference (p<0.05) compared to SHAM. In histology and morphometry, it was found that the groups treated with ATO+ATB or ATO alone showed better results in terms of preservation of the lung parenchyma, verifying delicate septa, a greater quantity of type II pneumocytes and less infiltration of inflammatory cells. No significant difference was found in these treatments when compared with the SHAM group regarding the amount of macrophages, lymphocytes, neutrophils, pneumocytes and septal thickness. SP-B quantification was significantly increased in the CLP group compared to the other groups. In turn, the expression of SP-B in the groups treated with ATO, ATB or a combination of the two was similar to that seen in the SHAM group. Protocols that contained antioxidants aimed at treating acute lung injury resulting from sepsis were more effective and it was found that SP-B, when quantified in the acute phase of injury, can be an important marker of disease progression.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pós-graduação em Saúde TranslacionalUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessProteína surfactante BLesão pulmonar agudaSepseAvaliação histopatológica e determinação da expressão da proteína surfactante tipo-b (SP-B) no pulmão de ratos sépticos tratados com ceftriaxone e antioxidantesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Vera Kaissa Souza Santos Bacelar.pdfDISSERTAÇÃO Vera Kaissa Souza Santos Bacelar.pdfapplication/pdf2054473https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/55171/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Vera%20Kaissa%20Souza%20Santos%20Bacelar.pdfb87f150345e44121a18cb0d891519dd2MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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