Pontos quânticos como sondas fluorescentes no estudo da carcinogênese em Células Gliais
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/14925 |
Resumo: | Glioblastoma (grau IV) é o tumor mais agressivo e infiltrante do sistema nervoso central (SNC), que mostra uma série de mutações, bem como alto grau de vascularidade, polimorfismo e atipia celular nuclear. Infelizmente, diagnóstico precoce de tumores cerebrais é difícil, uma vez que ferramentas de imagem não são eficientes para o diagnóstico correto desses tipos de tumores, levando a falhas no tratamento. Aqui nós descrevemos a síntese, caracterização e conjugação de pontos quânticos ou quantum dots (QDs) de telureto de cádmio (CdTe) recobertos com tiol e com o anticorpo contra a proteína ácida fibrilar glial (anti-GFAP), bem como, a preparação de lipossomas. O método de congelamento e descongelamento foi utilizado para encapsular os QDs em diferentes tipos de lipossomas e liberá-los em células tronco. Os lipossomas vazios e contendo CdTe QDs foram caracterizados por microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, tamanho e potencial zeta. Os QDs CdTe-anti-GFAP foram utilizados para um novo direcionamento in vivo e método de imagem para detecção do tipo de tumor glioblastoma U87 xenotransplantado em cérebro de camundongos suíços machos. CdTe QDs não conjugados e CdTe QDs conjugados foram utilizados para marcar U87 linha de células de tumor in vitro e astrócitos saudáveis. A citotoxicidade dos CdTe QDs com fluorescência no verde (530 nm) e no vermelho (644 nm), foi avaliada utilizando MTT nas células U87. O crescimento do tumor foi visualizado no interior do cérebro pela marcação com hematoxilina e eosina e mostrou a entrega com sucesso nas células U87 no parênquima cerebral. CdTe QDs conjugados com anti - GFAP foram injectados na região do tumor e a sua marcação na linhagem celular U87 foi visualizada por microscopia de fluorescência, mostrando dupla marcação com especificidade para vimentina em glioblastomas imunorreactivos. Em comparação com as células tumorais U87, que facilmente foram marcadas com o CdTe QDs conjugados com anti- GFAP, observouse que os astrócitos saudáveis mantidos em culturas primárias tiveram uma maior resistência à sua marcação e foram fracamente marcados. Os resultados descritos aqui direcionam para novas perspectivas na utilização de CdTe QDs na detecção de gliobastoma , sugerindo uma potencial aplicação em cirurgia guiada por imagem. |
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SEABRA, Maria Aparecida Barreto Lopeshttp://lattes.cnpq.br/5357828745131540http://lattes.cnpq.br/2234463053019457SANTOS, Beate SaegesserMOURA NETO, Vivaldo2016-01-18T14:03:34Z2016-01-18T14:03:34Z2014-03-24https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/14925Glioblastoma (grau IV) é o tumor mais agressivo e infiltrante do sistema nervoso central (SNC), que mostra uma série de mutações, bem como alto grau de vascularidade, polimorfismo e atipia celular nuclear. Infelizmente, diagnóstico precoce de tumores cerebrais é difícil, uma vez que ferramentas de imagem não são eficientes para o diagnóstico correto desses tipos de tumores, levando a falhas no tratamento. Aqui nós descrevemos a síntese, caracterização e conjugação de pontos quânticos ou quantum dots (QDs) de telureto de cádmio (CdTe) recobertos com tiol e com o anticorpo contra a proteína ácida fibrilar glial (anti-GFAP), bem como, a preparação de lipossomas. O método de congelamento e descongelamento foi utilizado para encapsular os QDs em diferentes tipos de lipossomas e liberá-los em células tronco. Os lipossomas vazios e contendo CdTe QDs foram caracterizados por microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, tamanho e potencial zeta. Os QDs CdTe-anti-GFAP foram utilizados para um novo direcionamento in vivo e método de imagem para detecção do tipo de tumor glioblastoma U87 xenotransplantado em cérebro de camundongos suíços machos. CdTe QDs não conjugados e CdTe QDs conjugados foram utilizados para marcar U87 linha de células de tumor in vitro e astrócitos saudáveis. A citotoxicidade dos CdTe QDs com fluorescência no verde (530 nm) e no vermelho (644 nm), foi avaliada utilizando MTT nas células U87. O crescimento do tumor foi visualizado no interior do cérebro pela marcação com hematoxilina e eosina e mostrou a entrega com sucesso nas células U87 no parênquima cerebral. CdTe QDs conjugados com anti - GFAP foram injectados na região do tumor e a sua marcação na linhagem celular U87 foi visualizada por microscopia de fluorescência, mostrando dupla marcação com especificidade para vimentina em glioblastomas imunorreactivos. Em comparação com as células tumorais U87, que facilmente foram marcadas com o CdTe QDs conjugados com anti- GFAP, observouse que os astrócitos saudáveis mantidos em culturas primárias tiveram uma maior resistência à sua marcação e foram fracamente marcados. Os resultados descritos aqui direcionam para novas perspectivas na utilização de CdTe QDs na detecção de gliobastoma , sugerindo uma potencial aplicação em cirurgia guiada por imagem.Glioblastoma (grade IV) is the most aggressive and infiltrating tumor of the central nervous system (CNS), showing a variety of mutations as well as high degree of vascularity, cell polymorphism and nuclear atypia. Unfortunately, early diagnostic of brain tumors is hard, as imaging tools are not efficient for proper diagnosis of these types of tumors, leading to treatment failures. Here we describe the synthesis, characterization and conjugation of thiol-capped CdTe with anti-glial fibrillar acidic protein (anti-GFAP) and preparation of liposomes. The freeze and thaw method was used to encapsulate the QDs in different types of liposomes and deliver them into stem cells. The empty and containing CdTe QDs liposomes were characterized by fluorescence microscopy, transmission electron microscopy, size and zeta potential. A new in vivo targeting and imaging method for U87 glioblastoma tumor type xenotransplanted into male swiss mice brain using aqueous colloidal CdTe quantum dots conjugated to anti-GFAP (CdTeanti- GFAP QDs) was developed. The red emitting CdTe QDs and the conjugated red-emitting CdTe QDs were used to label U87 tumor cell line in vitro and health astrocytes. Toxicity of isolated green (530 nm) and red (644 nm) emitting CdTe QDs, was evaluated using MTT assay applied to U87 cells. The tumor growth was visualized inside the brain by the hematoxylin and eosin staining and showed the successful delivery of the U87 cells into the brain parenchyma. CdTe-anti-GFAP QDs were injected into the tumor region and their uptake by the U87 cell line was visualized by fluorescence microscopy, showing specific double-labeling of vimentinimmunoreactive glioblastoma. Compared to U87 tumor cells, which easily take up anti-GFAP conjugated red-emitting CdTe QDs, healthy astrocytes kept in primary cultures offered more resistance to their incorporation and were weakly labeled. The results reported here provide new perspectives for using CdTe QDs in gliobastoma detection, suggesting their potential application in imaging-guided surgery.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Ciencias FarmaceuticasUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessGlioblastomaPontos QuânticosSondas FluorescentesModelo in vivoPontos quânticos como sondas fluorescentes no estudo da carcinogênese em Células Gliaisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILTese_FINAL-A4.pdf.jpgTese_FINAL-A4.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1375https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/14925/6/Tese_FINAL-A4.pdf.jpg68c904042eefb6621d885cd69f7808d4MD56ORIGINALTese_FINAL-A4.pdfTese_FINAL-A4.pdfapplication/pdf4196135https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/14925/1/Tese_FINAL-A4.pdf547188bb7660475ceab2a2f39962a9f5MD51Tese_FINAL-A4.pdfTese_FINAL-A4.pdfapplication/pdf4196135https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/14925/2/Tese_FINAL-A4.pdf547188bb7660475ceab2a2f39962a9f5MD52CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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