Potencial biotecnólogico de actinobactéria isolada da rizosfera de Aniba parviflora Syn Fragans (Macacaporanga) da Amazônia
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Data de Publicação: | 2020 |
Tipo de documento: | Tese |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/38483 |
Resumo: | Actinobactérias são instituídas por um grupo variado de bactérias filamentosas. Morfologicamente são caracterizadas como gram positivas, aspecto microscópico comum entre elas, além de possuírem elevado conteúdo de G+C (guanina e citosina) em seu ácido desoxirribonucléico (DNA), modificando o percentual desse conteúdo entre os gêneros. Podem ser aeróbicas, anaeróbicas ou microaerófilas, sendo capaz de se desenvolver em ambientes extremos, poluídos e hostis. Elas formam um grupo de microrganismos que mais se destaca quanto à produção de compostos bioativos e estão sendo o alvo da indústria biotecnológica por serem estimadas como fonte abundante desses compostos bioativos com estrutura química e ação farmacológica bastante diversificada. Os compostos bioativos naturais de origem microbiana são as principais fontes de antimicrobianos utilizados na atualidade, por outro lado, o rápido aumento da carga global de resistência a antimicrobianos, com o declínio concomitante na descoberta de novas moléculas antimicrobianas, a partir de nichos ecológicos ainda inexplorados, exige a busca de novos e eficazes metabólitos secundários, com propriedade antimicrobiana. Sendo assim, este estudo avaliou o potencial biotecnológico de Streptomyces sp. que foi isolada do solo da rizosfera, da Amazônia, de Aniba parviflora Syn fragans (Macacaporanga) pela técnica do ágar-bloco. Foi realizada a identificação clássica e molecular, realizada as características fisiológicas e bioquímicas do microrganismo, extração de metabólitos bioativos do líquido fermentado e da biomassa, cromatografia em camada delgada, extração de molécula antimicrobiana, prospecção química preliminar, atividade antioxidante e atividade inseticida do extrado bruto. A indentificação clássica e molecular identificou a actinobactéria como Streptomyces cinereus. As características bioquímicas revelaram a produção de amilase tendo um halo enzimático de 21,6 mm e o diâmetro da colônia chegou a 18mm, caseinase halo enzimático de 48,6 e diâmetro da colônia 18,3 e hemólise halo enzimático 19,3 e diâmetro da colônia 11,8. O extrato bruto da Streptomyces cinereus foi obtido no caldo de fermentação seguido de extração com acetato de etila, para posterior avaliação da concentração inibitória mínima (CIM) contra as leveduras Candida albicans e Candida krusei. Os metabólitos antifúngicos foram produzidos a partir da fermentação de 24h frente à Candida albicans, e após 48h ativos sobre Candida krusei. A concentração fungicida mínima para Candida krusei foi de 156μg/mL, para Candida albicans foi de 78,1μg/mL revelando a produção de compostos bioativos por Streptomyces cinereus com atividade antifúngica contra fungos filamentosos e leveduras de interesse clínico. Cromatografia em camada delgada revelou a presença de metabólitos secundários pertencentes à classe das cumarinas, derivados de antracênicos, xantinas, compostos fenólicos, triterpenos e esteróides. Ainda foi realizada a determinação da atividade antioxidante que apresentou varredura de 14,74% na concentração de 10mg/dl de ácido ascórbico. O poder redutor do íon molibdato teve a absorbância na concentação de 10mg/ml de 0,370. A atividade inseticida por fumigação e contato contra Sitophilus zeamais revelou uma potencial atividade inseticida do extrato bruto. Por fim, a Streptomyces revelou uma importante produção de metabólitos secundários bioativos sobre fungos e insetos. |
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Podem ser aeróbicas, anaeróbicas ou microaerófilas, sendo capaz de se desenvolver em ambientes extremos, poluídos e hostis. Elas formam um grupo de microrganismos que mais se destaca quanto à produção de compostos bioativos e estão sendo o alvo da indústria biotecnológica por serem estimadas como fonte abundante desses compostos bioativos com estrutura química e ação farmacológica bastante diversificada. Os compostos bioativos naturais de origem microbiana são as principais fontes de antimicrobianos utilizados na atualidade, por outro lado, o rápido aumento da carga global de resistência a antimicrobianos, com o declínio concomitante na descoberta de novas moléculas antimicrobianas, a partir de nichos ecológicos ainda inexplorados, exige a busca de novos e eficazes metabólitos secundários, com propriedade antimicrobiana. Sendo assim, este estudo avaliou o potencial biotecnológico de Streptomyces sp. que foi isolada do solo da rizosfera, da Amazônia, de Aniba parviflora Syn fragans (Macacaporanga) pela técnica do ágar-bloco. Foi realizada a identificação clássica e molecular, realizada as características fisiológicas e bioquímicas do microrganismo, extração de metabólitos bioativos do líquido fermentado e da biomassa, cromatografia em camada delgada, extração de molécula antimicrobiana, prospecção química preliminar, atividade antioxidante e atividade inseticida do extrado bruto. A indentificação clássica e molecular identificou a actinobactéria como Streptomyces cinereus. As características bioquímicas revelaram a produção de amilase tendo um halo enzimático de 21,6 mm e o diâmetro da colônia chegou a 18mm, caseinase halo enzimático de 48,6 e diâmetro da colônia 18,3 e hemólise halo enzimático 19,3 e diâmetro da colônia 11,8. O extrato bruto da Streptomyces cinereus foi obtido no caldo de fermentação seguido de extração com acetato de etila, para posterior avaliação da concentração inibitória mínima (CIM) contra as leveduras Candida albicans e Candida krusei. Os metabólitos antifúngicos foram produzidos a partir da fermentação de 24h frente à Candida albicans, e após 48h ativos sobre Candida krusei. A concentração fungicida mínima para Candida krusei foi de 156μg/mL, para Candida albicans foi de 78,1μg/mL revelando a produção de compostos bioativos por Streptomyces cinereus com atividade antifúngica contra fungos filamentosos e leveduras de interesse clínico. Cromatografia em camada delgada revelou a presença de metabólitos secundários pertencentes à classe das cumarinas, derivados de antracênicos, xantinas, compostos fenólicos, triterpenos e esteróides. Ainda foi realizada a determinação da atividade antioxidante que apresentou varredura de 14,74% na concentração de 10mg/dl de ácido ascórbico. O poder redutor do íon molibdato teve a absorbância na concentação de 10mg/ml de 0,370. A atividade inseticida por fumigação e contato contra Sitophilus zeamais revelou uma potencial atividade inseticida do extrato bruto. Por fim, a Streptomyces revelou uma importante produção de metabólitos secundários bioativos sobre fungos e insetos.Actinobacteria are instituted by a varied group of filamentous bacteria. Morphologically they are characterized as gram positive, a common microscopic aspect among them, besides having high G+C content (guanine and cytosine) in their deoxyribonucleic acid (DNA), modifying the percentage of this content between genera. They can be aerobic, anaerobic or microaerobic, and can develop in extreme, polluted and hostile environments. They form a group of microorganisms that stands out most regarding the production of bioactive compounds and are being the target of the biotechnological industry because they are estimated as an abundant source of these bioactive compounds with chemical structure and very diversified pharmacological action. Natural bioactive compounds of microbial origin are the main sources of antimicrobials currently used, on the other hand, the rapid increase in the global burden of antimicrobial resistance, with the concomitant decline in the discovery of new antimicrobial molecules, from ecological niches still unexplored, requires the search for new and effective secondary metabolites with antimicrobial property. Thus, this study evaluated the biotechnological potential of Streptomyces sp. which was isolated from the soil of the rhizosphere, from the Amazon, from Aniba parviflora Syn fragans (Macacaporanga) by the block agar technique. Classical and molecular indentification was performed, the physiological and biochemical characteristics of the microorganism, extraction of bioactive metabolites from fermented liquid and biomass, thin layer chromatography, extraction of antimicrobial molecule, preliminary chemical prospection, antioxidant activity and insecticide activity of crude extraction were performed. Classical and molecular indentification identified actinobacteria as Streptomyces cinereus. Biochemical characteristics revealed the production of amylase having an enzymatic halo of 21.6 mm and the colony diameter reached 18 mm, enzymatic halo caseinase of 48.6 and colony diameter 18.3 and enzymatic halo hemolysis 19.3 and colony diameter 11.8. The crude extract of Streptomyces cinereus was obtained in the fermentation broth followed by extraction with ethyl acetate, for further evaluation of the minimum inhibitory concentration (MIC) against Candida albicans and Candida krusei yeasts. The antifungal metabolites were produced from 24-hour fermentation against Candida albicans, and after 48h active on Candida krusei. The minimum fungicide concentration for Candida krusei was 156μg/mL, for Candida albicans it was 78.1μg/mL revealing the production of bioactive compounds by Streptomyces cinereus with antifungal activity against filamentous fungi and yeasts of clinical interest. Thin layer chromatography revealed the presence of secondary metabolites belonging to the class of coumarins, derived from anthracenes, xanthines, phenolic compounds, triterpenes and steroids. Antioxidant activity that showed a scan of 14.74% at the concentration of 10mg/dl of ascorbic acid was also determined. The reducing power of the molyblate ion had absorbance at 10mg/ml of 0.370. Insecticide activity by fumigation and contact against Sitophilus zeamais revealed a potential insecticide activity of the crude extract. Finally, Streptomyces revealed an important production of bioactive secondary metabolites on fungi and insects.Actinobacterias son instituidas por un grupo diverso de bacterias filamentosas. Morfológicamente se caracterizan por ser grampositivos, aspecto microscópico común entre ellos, además de tener un alto contenido de G + C (guanina y citosina) en su ácido desoxirribonucleico (ADN), cambiando el porcentaje de este contenido entre géneros. Pueden ser aeróbicos, anaeróbicos o microaerófilos, pudiendo desarrollarse en ambientes extremos, contaminados y hostiles. Forman un grupo de microorganismos que se destaca más en términos de producción de compuestos bioactivos y están siendo el objetivo de la industria biotecnológica porque se estiman como una fuente abundante de estos compuestos bioactivos con una estructura química y acción farmacológica muy diversa. Los compuestos bioactivos naturales de origen microbiano son las principales fuentes de antimicrobianos utilizados hoy en día, por otro lado, el rápido aumento de la carga global de resistencia a los antimicrobianos, con la disminución concomitante en el descubrimiento de nuevas moléculas antimicrobianas, a partir de nichos ecológicos aún sin explorar, requiere la búsqueda de metabolitos secundarios nuevos y efectivos, con propiedades antimicrobianas. Por lo tanto, este estudio evaluó el potencial biotecnológico de Streptomyces sp. que se aisló del suelo de la rizosfera del Amazonas, de Aniba parviflora Syn fragans (Macacaporanga) mediante la técnica de bloque de agar. Se realizó la identificación clásica y molecular, se realizaron las características fisiológicas y bioquímicas del microorganismo, extracción de metabolitos bioactivos del líquido fermentado y biomasa, cromatografía en capa fina, extracción de molécula antimicrobiana, prospección química preliminar, actividad antioxidante y actividad insecticida del extracto crudo. La identificación clásica y molecular identificó actinobacterias como Streptomyces cinereus. Las características bioquímicas revelaron la producción de amilasa que tiene un halo enzimático de 21,6 mm y el diámetro de la colonia alcanzó 18 mm, la caseinasa de un halo enzimático de 48,6 y un diámetro de colonia de 18,3 y una hemólisis enzimática de halo de 19,3 y un diámetro de colonia 11.8. El extracto crudo de Streptomyces cinereus se obtuvo en el caldo de fermentación seguido de extracción con acetato de etilo, para una evaluación posterior de la concentración inhibitoria mínima (MIC) contra las levaduras Candida albicans y Candida krusei. Los metabolitos antifúngicos se produjeron a partir de la fermentación de 24 h contra Candida albicans, y después de 48 h de actividad en Candida krusei. La concentración fungicida mínima para Candida krusei fue de 156 μg / ml, para Candida albicans fue de 78.1 μg/ml, lo que revela la producción de compuestos bioactivos por Streptomyces cinereus con actividad antifúngica contra hongos filamentosos y levaduras de interés clínico. La cromatografía en capa fina reveló la presencia de metabolitos secundarios pertenecientes a la clase de cumarina, derivados de antracenos, xantinas, compuestos fenólicos, triterpenos y esteroides. También se llevó a cabo la determinación de la actividad antioxidante, que mostró un barrido del 14,74% en la concentración de 10 mg / dl de ácido ascórbico. El poder reductor del ion molibdato tenía una absorbancia a una concentración de 10 mg / ml de 0,370. La actividad insecticida por fumigación y contacto contra Sitophilus zeamais reveló una posible actividad insecticida del extracto crudo. Finalmente, Streptomyces reveló una producción importante de metabolitos bioactivos secundarios en hongos e insectos.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Bioquimica e FisiologiaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessActinobacteriaStreptomycesMetabólitosPotencial biotecnólogico de actinobactéria isolada da rizosfera de Aniba parviflora Syn Fragans (Macacaporanga) da Amazôniainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALTESE Apolonio Alves de Lima Junior.pdfTESE Apolonio Alves de Lima Junior.pdfapplication/pdf2206109https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/38483/1/TESE%20Apolonio%20Alves%20de%20Lima%20Junior.pdf065dd08c1fe0f78723ec2dc80b3e21e4MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/38483/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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Actinobacteria Streptomyces Metabólitos |
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Actinobactérias são instituídas por um grupo variado de bactérias filamentosas. Morfologicamente são caracterizadas como gram positivas, aspecto microscópico comum entre elas, além de possuírem elevado conteúdo de G+C (guanina e citosina) em seu ácido desoxirribonucléico (DNA), modificando o percentual desse conteúdo entre os gêneros. Podem ser aeróbicas, anaeróbicas ou microaerófilas, sendo capaz de se desenvolver em ambientes extremos, poluídos e hostis. Elas formam um grupo de microrganismos que mais se destaca quanto à produção de compostos bioativos e estão sendo o alvo da indústria biotecnológica por serem estimadas como fonte abundante desses compostos bioativos com estrutura química e ação farmacológica bastante diversificada. Os compostos bioativos naturais de origem microbiana são as principais fontes de antimicrobianos utilizados na atualidade, por outro lado, o rápido aumento da carga global de resistência a antimicrobianos, com o declínio concomitante na descoberta de novas moléculas antimicrobianas, a partir de nichos ecológicos ainda inexplorados, exige a busca de novos e eficazes metabólitos secundários, com propriedade antimicrobiana. Sendo assim, este estudo avaliou o potencial biotecnológico de Streptomyces sp. que foi isolada do solo da rizosfera, da Amazônia, de Aniba parviflora Syn fragans (Macacaporanga) pela técnica do ágar-bloco. Foi realizada a identificação clássica e molecular, realizada as características fisiológicas e bioquímicas do microrganismo, extração de metabólitos bioativos do líquido fermentado e da biomassa, cromatografia em camada delgada, extração de molécula antimicrobiana, prospecção química preliminar, atividade antioxidante e atividade inseticida do extrado bruto. A indentificação clássica e molecular identificou a actinobactéria como Streptomyces cinereus. As características bioquímicas revelaram a produção de amilase tendo um halo enzimático de 21,6 mm e o diâmetro da colônia chegou a 18mm, caseinase halo enzimático de 48,6 e diâmetro da colônia 18,3 e hemólise halo enzimático 19,3 e diâmetro da colônia 11,8. O extrato bruto da Streptomyces cinereus foi obtido no caldo de fermentação seguido de extração com acetato de etila, para posterior avaliação da concentração inibitória mínima (CIM) contra as leveduras Candida albicans e Candida krusei. Os metabólitos antifúngicos foram produzidos a partir da fermentação de 24h frente à Candida albicans, e após 48h ativos sobre Candida krusei. A concentração fungicida mínima para Candida krusei foi de 156μg/mL, para Candida albicans foi de 78,1μg/mL revelando a produção de compostos bioativos por Streptomyces cinereus com atividade antifúngica contra fungos filamentosos e leveduras de interesse clínico. Cromatografia em camada delgada revelou a presença de metabólitos secundários pertencentes à classe das cumarinas, derivados de antracênicos, xantinas, compostos fenólicos, triterpenos e esteróides. Ainda foi realizada a determinação da atividade antioxidante que apresentou varredura de 14,74% na concentração de 10mg/dl de ácido ascórbico. O poder redutor do íon molibdato teve a absorbância na concentação de 10mg/ml de 0,370. A atividade inseticida por fumigação e contato contra Sitophilus zeamais revelou uma potencial atividade inseticida do extrato bruto. Por fim, a Streptomyces revelou uma importante produção de metabólitos secundários bioativos sobre fungos e insetos. |
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2020 |
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LIMA JUNIOR, Apolonio Alves de. Potencial biotecnólogico de actinobactéria isolada da rizosfera de Aniba parviflora Syn Fragans (Macacaporanga) da Amazônia. 2020. Tese (Doutorado em Bioquímica e Fisiologia) - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2020. |
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