Utilização da Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP) na detecção de genes de resistência em Enterobactérias produtoras de Carbapenemases

• Autor(a) principal: Miller, Róger Giusti
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca
• Texto Completo: http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/handle/prefix/11599
• topic: CIENCIAS BIOLOGICAS; Loop-Mediated Isothermal Amplification; Resistance genes; Enterobacteriaceae; Carbapenemases; Amplificação Isotérmica Mediada por Loop; Genes de resistência; BIOQUIMICA

Vários métodos têm sido propostos para identificar genes de resistência em bactérias multirresistentes. O mais utilizado para detectar a resistência adquirida é a amplificação do DNA alvo por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Em laboratórios pequenos, a aquisição desse equipamento é cara, muitas vezes inviabilizando a implementação do método. Assim, métodos alternativos de genotipagem têm sido propostos, com destaque para a amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP), que apresenta baixo custo operacional e boa especificidade e sensibilidade para a detecção alternativa de genes de resistência bacteriana. O presente estudo teve como objetivo estabelecer o uso de LAMP para detectar o gene blaKPC através da produção de beta-lactamase do tipo carbapenemase. Setenta e seis amostras de Enterobacteriaceae isoladas de amostras clínicas de pacientes do Hospital Escola UFPel-Ebserh foram isoladas, identificadas fenotípicamente e separadas de acordo com seu perfil de resistência. O marcador de resistência detectado com maior frequência foi a produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL), 51,32% (39/76), seguido pela coprodução de ESBL e carbapenemases, 35,53% (27/76), e carbapenemases isoladamente, 11,84 % (9/76). Encontramos apenas um caso de coprodução de KPC+MBL, 1,31% (1/76). As 76 amostras foram analisadas por qPCR para os genes blaKPC e blaNDM-1, obtendo 47,36% (36/76) de positividade para o gene blaKPC e 18,42% (14/76) para o gene blaNDM-1. Das 36 amostras que testaram positivo para o gene blaKPC, 25 concordaram com o teste fenotípico e foram usadas para otimizar os ensaios LAMP. No ensaio LAMP, verificamos a taxa de concordância substancial de LAMP com qPCR, com o valor do índice Kappa igual a 0,761. A sensibilidade foi avaliada a partir das mesmas diluições usadas em qPCR. O resultado da sensibilidade mostrou que o LAMP detectou 1,5 UFC mL-1, dez vezes mais sensível que o qPCR. Nossos achados indicam que o ensaio LAMP pode ser utilizado no setor de bacteriologia e confirma as carbapenemases em rotinas e estudos epidemiológicos.