Aplicação da glicoproteína D recombinante de Herpesvírus bovino 5 como antígeno em teste de imunodiagnóstico e vacina de subunidade

• Autor(a) principal: Dummer, Luana Alves
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca
• Texto Completo: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/8995
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA ANIMAL; Biotecnologia; Pichia pastoris; Herpesvírus; Bovinos

As novas estratégias no desenvolvimento de vacinas contra o Herpesvírus bovino 1 e 5 focam nas glicoproteínas do envelope viral, como a gD, a qual atua na ligação e fusão do envelope viral com a membrana de células permissivas. A gD está presente em grande quantidade no envelope e estimula resposta imune humoral e celular no hospedeiro. O diagnóstico sorológico através de teste imuno enzimático, como o ELISA Indireto, também utiliza as glicoproteínas do envelope viral, uma vez que estas estão expostas na estrutura viral. Desta forma, o objetivo deste estudo foi aplicar a gD recombinante do BoHV-5 expressa em Pichia pastoris, após caracterização antigênica, como antígeno no desenvolvimento de uma vacina de subunidade e de um ELISA Indireto visando o controle da infecção por BoHV-5, o qual é o agente responsável por surtos de meningoencefalite que ocasionam perdas econômicas na pecuária brasileira. A vacina de subunidade desenvolvida foi capaz de estimular resposta imune humoral em camundongos, com a presença de anticorpos neutralizantes, quando administrada sozinha ou com adjuvantes imunológicos. A resposta imune celular foi observada através do aumento da expressão de mRNA de citocinas associadas a este tipo de resposta, como IFN-!, IL-17 e GM-CSF, quando a vacina foi formulada com o adjuvante oleoso EmulsigenDDA. O ELISA Indireto desenvolvido demonstrou alta sensibilidade (100%) e especificidade (92.9%) quando comparado a técnica de soroneutralização viral, a qual é considerada a técnica padrão para o diagnóstico sorológico de BoHV-1 e -5. A rgD de BoHV expressa em P. pastoris possui conformação tridimensional semelhante a gD nativa de BoHV-5. A rgD é imunogênica, capaz de induzir formação de anticorpos neutralizantes e a vacina de subunidade utilizando a rgD como antígeno induz uma resposta imunológica Th1/Th2 balanceada. A antigenicidade da proteína foi confirmada com o seu uso em um ELISA Indireto, o qual pode ser utilizado para triagem rápida de rebanhos infectados com BoHV-5.