Bactérias multirresistentes oriundas de mastite bovina: suscetibilidade a antissépticos.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Patrícia Jacob
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca
Texto Completo: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/6080
Resumo: A mastite subclínica é mais prevalente e é responsável pela perda de 70% na produção, enquanto a mastite clínica ocasiona perdas menores. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar bactérias patogênicas de 94 amostras de leite com mastite e testar a suscetibilidade de 38 bacterias multiresistentes a antibioticos frente a antissepticos utilizados no pre e pos dipping atraves de duas metodologias assim como verificar citotoxicidade destes produtos. Destes produtos previamente identificados em tubos de ensaio foram semeadas em agar sangue, e os resultados observados em 24 horas após permanecer 36°C em condições aeróbias. O isolamento bacteriano foi observado em 62 (65,96%) amostras. Após a caracterização bioquímica foram identificados: Staphylococcus spp. Coagulase negativa (n = 29), Staphylococcus spp. Coagulase positiva (n = 6), Corynebacterium spp. (N = 16), Streptococcus spp. (N = 7), Streptococcus uberis (n = 4). Um outro grupo de 38 isolados, sendo identificados como Staphylococcus aureus (11), Staphylococcus lentus (1), Staphylococcus sciuri (1), Kocuria kristinae (2), Kocuria varians (1), Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris (1), Enterococcus casseliflavus (1), Enterococcus faecalis (1), Staphylococcus spp. Coagulase positivo (15), Staphylococcus spp. Coagulase negativo (3). Foram selecionados para serem testados frente a três antissépticos: hipoclorito de sódio, iodo e clorexidine, através do teste de Microdiluiçao em Caldo (MC) para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM), de acordo com as normas CLSI (Clinical and Laboratory Institute), documento M7-A6 (CLSI 2003). No segundo experimento os desinfetantes foram avaliados através do Teste de Eficiência dos Antissépticos, sendo selecionados para este, cinco isolados bacterianos e três desinfetantes, conforme metodologia adaptada por Schuchu et al. (2008). Depois foi realizado teste de citotoxicidade em frente a células MDBK (Madin-Darby bovine kidney) através do ensaio com sal de tetrazolium (MTT). Dentre os antissépticos testados o que apresentou melhor atividade antisséptica frente às 38 bactérias foi clorexidine, onde 71,05% dos isolados foram sensíveis, já o iodo foi o desinfetante que apresentou menor efeito desinfetante sendo que 21,02% dos isolados se mostraram resistentes. No teste de eficiência dos desinfetantes os melhores resultados foram obtidos com iodo onde o crescimento variou de zero a 2% UFC no tempo de 30’’. Com hipoclorito de sódio a variação foi de zero a 2 % UFC no tempo de 60’’, ambos resultados em salina. O Clorexidine variou seu crescimento, no tempo de 30’’, de zero a 1% UFC, em salina. Quando comparado com matéria orgânica, leite, observou-se que este demonstrou como fator de proteção aos microrganismos. A variação observada no iodo foi de 3% UFC em 15’, já do hipoclorito de 66% UFC no mesmo tempo descrito. Já a clorexidine não observou-se crescimento em 15’. A identificação do agente etiológico é importante para a implementação de métodos de controle e prevenção de mastite e para o monitoramento do rebanho. Mas para isso a escolha adequada do antissépticos, com conhecimento da CIM e do tempo necessario de exposição, é importante para o controle efetivo destas bactérias.
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spelling 2020-06-29T12:46:18Z2020-06-262020-06-29T12:46:18Z2013-03-09SANTOS, Patrícia Jacob. Bactérias multirresistentes oriundas de mastite bovina subclínica: suscetibilidade a antissépticos. 2013. 83 f. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Bioprospecção. Centro de Ciências Químicas, Farmacêuticas e de Alimentos. Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, 2013.http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/6080A mastite subclínica é mais prevalente e é responsável pela perda de 70% na produção, enquanto a mastite clínica ocasiona perdas menores. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar bactérias patogênicas de 94 amostras de leite com mastite e testar a suscetibilidade de 38 bacterias multiresistentes a antibioticos frente a antissepticos utilizados no pre e pos dipping atraves de duas metodologias assim como verificar citotoxicidade destes produtos. Destes produtos previamente identificados em tubos de ensaio foram semeadas em agar sangue, e os resultados observados em 24 horas após permanecer 36°C em condições aeróbias. O isolamento bacteriano foi observado em 62 (65,96%) amostras. Após a caracterização bioquímica foram identificados: Staphylococcus spp. Coagulase negativa (n = 29), Staphylococcus spp. Coagulase positiva (n = 6), Corynebacterium spp. (N = 16), Streptococcus spp. (N = 7), Streptococcus uberis (n = 4). Um outro grupo de 38 isolados, sendo identificados como Staphylococcus aureus (11), Staphylococcus lentus (1), Staphylococcus sciuri (1), Kocuria kristinae (2), Kocuria varians (1), Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris (1), Enterococcus casseliflavus (1), Enterococcus faecalis (1), Staphylococcus spp. Coagulase positivo (15), Staphylococcus spp. Coagulase negativo (3). Foram selecionados para serem testados frente a três antissépticos: hipoclorito de sódio, iodo e clorexidine, através do teste de Microdiluiçao em Caldo (MC) para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM), de acordo com as normas CLSI (Clinical and Laboratory Institute), documento M7-A6 (CLSI 2003). No segundo experimento os desinfetantes foram avaliados através do Teste de Eficiência dos Antissépticos, sendo selecionados para este, cinco isolados bacterianos e três desinfetantes, conforme metodologia adaptada por Schuchu et al. (2008). Depois foi realizado teste de citotoxicidade em frente a células MDBK (Madin-Darby bovine kidney) através do ensaio com sal de tetrazolium (MTT). Dentre os antissépticos testados o que apresentou melhor atividade antisséptica frente às 38 bactérias foi clorexidine, onde 71,05% dos isolados foram sensíveis, já o iodo foi o desinfetante que apresentou menor efeito desinfetante sendo que 21,02% dos isolados se mostraram resistentes. No teste de eficiência dos desinfetantes os melhores resultados foram obtidos com iodo onde o crescimento variou de zero a 2% UFC no tempo de 30’’. Com hipoclorito de sódio a variação foi de zero a 2 % UFC no tempo de 60’’, ambos resultados em salina. O Clorexidine variou seu crescimento, no tempo de 30’’, de zero a 1% UFC, em salina. Quando comparado com matéria orgânica, leite, observou-se que este demonstrou como fator de proteção aos microrganismos. A variação observada no iodo foi de 3% UFC em 15’, já do hipoclorito de 66% UFC no mesmo tempo descrito. Já a clorexidine não observou-se crescimento em 15’. A identificação do agente etiológico é importante para a implementação de métodos de controle e prevenção de mastite e para o monitoramento do rebanho. Mas para isso a escolha adequada do antissépticos, com conhecimento da CIM e do tempo necessario de exposição, é importante para o controle efetivo destas bactérias.Subclinical mastitis is more prevalent and is responsible for 70% loss in production, while clinical mastitis causes minor losses. The aim of this study was to isolate and identify pathogenic bacteria of 94 milk samples from mastitis and test the susceptibility of 38 multiresistant bacteria to antibiotics compared to antiseptics used in pre and post dipping through two methodologies as well as verifying cytotoxicity. PCR products previously identified in test tubes were inoculated on blood agar and the results observed within 24 hours after standing at 36 ° C under aerobic conditions. Bacteria growth was noted in 62 (65.96%) samples. After the biochemical characterization were identified: Staphylococcus spp. Coagulase-negative (n = 29), Staphylococcus spp. Coagulase positive (n = 6), Corynebacterium spp. (N = 16), Streptococcus spp. (N = 7), Streptococcus uberis (n = 4). Another group of 38 isolates was identified as Staphylococcus aureus (11), Staphylococcus lentus (1) Staphylococcus sciuri (1), Kocuria kristinae (2) Kocuria varians (1) Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris (1), Enterococcus casseliflavus (1), Enterococcus faecalis (1) Staphylococcus spp. coagulase positive (15), Staphylococcus spp. Coagulase-negative (3). Were selected to be tested against three antiseptics: sodium hypochlorite, iodine and chlorhexidine by testing microdilution (MC) for the assessment of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC), in accordance with the standards CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), document M7-A6 (CLSI 2003). In the second experiment, the disinfectants were evaluated by Efficiency Test of antiseptics, being selected for this, five strains against the two disinfectants, as adapted methodology (Schuchu et al., 2008). After cytotoxicity assay performed in front of MDBK (Madin-Darby bovine kidney) assay using the tetrazolium salt (MTT). Among the antiseptics tested presented the best activity to front antiseptic chlorhexidine was 38 bacteria, where 71.05% of the isolates were susceptible, since iodine was the disinfectant of lowest disinfectant effect of which 21.02% of the isolates were resistant. In the test of the effectiveness of disinfectants best results were obtained with iodine where gowth ranged from o to 2% of UFC at time 30”. White sodium hipoclorite, the variation was from zero to 2% UFC 60” in time, results im both saline. When compared with organic matter milk, observed that this demonstrated a protective factor for microorganisms the variation in iodine was 3% UFC 15’, and sodium hypochlorite has UFC by 66% in the same time UFC described. Already chlorhexidine growth was not observed in 15’. The identification of the etiologic agent is important for the implementation of methods of control and prevention of mastitis and for monitoring the herd. But for that the proper choice of antiseptics, with knowledge of the CIM knowledge and exposure time, it is necessary for the effective control of these bacteria.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESporUniversidade Federal de PelotasPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e BioprospecçãoUFPelBrasilCentro de Ciências Químicas, Farmacêuticas e de AlimentosCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICAMastiteAntissépticosBactériasResistênciaMastitisAntisepticBacteriaResistanceBactérias multirresistentes oriundas de mastite bovina: suscetibilidade a antissépticos.Multiresistant bacteria derived from bovine subclinical mastitis: susceptibility to antiseptics.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttp://lattes.cnpq.br/8912363350257626http://lattes.cnpq.br/3560823637748071Nascente, Patrícia da SilvaSantos, Patrícia Jacobinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFPel - Guaiacainstname:Universidade Federal de Pelotas (UFPEL)instacron:UFPELTEXTDISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdf.txtDISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdf.txtExtracted texttext/plain139496http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/6080/6/DISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdf.txtc75d26b80f52ffff7b052cc04ae67518MD56open accessTHUMBNAILDISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdf.jpgDISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1340http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/6080/7/DISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdf.jpg8fc5be95e6370fd9b39365393b92cc88MD57open accessORIGINALDISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdfDISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdfapplication/pdf971218http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/6080/1/DISSERTACAO_PATRICIA_JACOB_SANTOS.pdfa5c8329eb2039551c5a2ab52550a9da7MD51open accessCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; 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