Avaliação de mecanismos pós-trancricionais na regulação da expressão heteróloga em tripanossomas
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2011 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1884/26158 |
Resumo: | Resumo: A genomica funcional e um campo em ascensao, o que se deve em parte ao numero crescente de sequencias de genomas publicados, o que tende a aumentar com o advento de novas plataformas de sequenciamento. Para elucidar a funcao genica em tripanossomas, ha um conjunto de tecnicas e metodologias que podem ser empregadas. Uma delas e a expressao heterologa utilizando promotores regulados por repressor de tetraciclina. No entanto, alguns relatos demonstraram que ha uma certa fraqueza no controle da expressao de genes toxicos na ausencia do indutor, e este fato pode limitar os avancos de diversas abordagens pos genomica. Alem disso, estes sistemas requerem previa modificacao de celulas, que e trabalhoso e pode resultar em mudancas fisiologicas, tais como a patogenicidade dos microorganismos. Partindo desta premissa, nos projetamos dois vetores de expressao em tripanossomas, um para Trypanosoma brucei, que regula a expressao genica no nivel transcricional pelo promotor GPEET com operadores de tetraciclina (Tet) e pos-transcricionalmente por moleculas de riboswitches, ribozimas sensiveis a tetraciclina. O segundo grupo de plasmideos foi projetado para regular a expressao genica em Trypanosoma cruzi apenas pos-transcricionalmente por moleculas de riboswitches. As construcoes foram criadas usando pLEW 100 e pRock como vetores parentais para T. cruzi e T. brucei, respectivamente. Os niveis de regulacao por riboswitch inativado por tetraciclina atingiu cerca de 3 a 4 vezes no aumento da expressao do gene reporter RLUC, utilizando Tet a 1 ƒÊg/mL. Por outro lado, o riboswitch ativado por Tet provocou reducao cerca de 2 vezes na expressao do gene reporter nas mesmas condicoes. Alem disso, nossos dados demonstraram uma possivel influencia negativa sobre niveis de expressao genica em T. cruzi quando doses elevadas de tetraciclina (10 ƒÊg/mL) foram testadas. Nossas tentativas iniciais mostraram que riboswitches sao funcionais nestes organismos e podem ser usados para regular a expressao genica em tripanossomas. No entanto, este sistema deve ser melhorado para obter maiores niveis de regulacao. Sugerimos que mudancas no numero e/ou na posicao dos riboswitches podem contribuir para incrementar a regulacao neste sistema. |
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Cambri, Geison EduardoMonteiro, Rose AdeleRocha, Wanderson Duarte daUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Bioquímica2011-10-03T10:01:11Z2011-10-03T10:01:11Z2011-10-03http://hdl.handle.net/1884/26158Resumo: A genomica funcional e um campo em ascensao, o que se deve em parte ao numero crescente de sequencias de genomas publicados, o que tende a aumentar com o advento de novas plataformas de sequenciamento. Para elucidar a funcao genica em tripanossomas, ha um conjunto de tecnicas e metodologias que podem ser empregadas. Uma delas e a expressao heterologa utilizando promotores regulados por repressor de tetraciclina. No entanto, alguns relatos demonstraram que ha uma certa fraqueza no controle da expressao de genes toxicos na ausencia do indutor, e este fato pode limitar os avancos de diversas abordagens pos genomica. Alem disso, estes sistemas requerem previa modificacao de celulas, que e trabalhoso e pode resultar em mudancas fisiologicas, tais como a patogenicidade dos microorganismos. Partindo desta premissa, nos projetamos dois vetores de expressao em tripanossomas, um para Trypanosoma brucei, que regula a expressao genica no nivel transcricional pelo promotor GPEET com operadores de tetraciclina (Tet) e pos-transcricionalmente por moleculas de riboswitches, ribozimas sensiveis a tetraciclina. O segundo grupo de plasmideos foi projetado para regular a expressao genica em Trypanosoma cruzi apenas pos-transcricionalmente por moleculas de riboswitches. As construcoes foram criadas usando pLEW 100 e pRock como vetores parentais para T. cruzi e T. brucei, respectivamente. Os niveis de regulacao por riboswitch inativado por tetraciclina atingiu cerca de 3 a 4 vezes no aumento da expressao do gene reporter RLUC, utilizando Tet a 1 ƒÊg/mL. Por outro lado, o riboswitch ativado por Tet provocou reducao cerca de 2 vezes na expressao do gene reporter nas mesmas condicoes. Alem disso, nossos dados demonstraram uma possivel influencia negativa sobre niveis de expressao genica em T. cruzi quando doses elevadas de tetraciclina (10 ƒÊg/mL) foram testadas. Nossas tentativas iniciais mostraram que riboswitches sao funcionais nestes organismos e podem ser usados para regular a expressao genica em tripanossomas. No entanto, este sistema deve ser melhorado para obter maiores niveis de regulacao. Sugerimos que mudancas no numero e/ou na posicao dos riboswitches podem contribuir para incrementar a regulacao neste sistema.application/pdfTesesAvaliação de mecanismos pós-trancricionais na regulação da expressão heteróloga em tripanossomasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALMestrado Cambri GE Fev 2011.pdfapplication/pdf2518399https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26158/1/Mestrado%20Cambri%20GE%20Fev%202011.pdf061ad8301e06cef8ceb813c9f8dcd190MD51open accessTEXTMestrado Cambri GE Fev 2011.pdf.txtMestrado Cambri GE Fev 2011.pdf.txtExtracted Texttext/plain178829https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26158/2/Mestrado%20Cambri%20GE%20Fev%202011.pdf.txt4f885e0f3b3d72749c4b5268b70b4779MD52open accessTHUMBNAILMestrado Cambri GE Fev 2011.pdf.jpgMestrado Cambri GE Fev 2011.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1375https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26158/3/Mestrado%20Cambri%20GE%20Fev%202011.pdf.jpg67fd44e2d3930bccd22e0632c74365a3MD53open access1884/261582016-04-07 03:26:49.676open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/26158Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-04-07T06:26:49Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
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