D-gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase de celulas HeLa : purificação, estudos cineticos e imunologicos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gomes, Elisa Maines
Data de Publicação: 1990
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/87434
Resumo: Orientadora: Momoyo Nakano
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spelling Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Nakano, MomoyoGomes, Elisa Maines2024-04-26T18:50:57Z2024-04-26T18:50:57Z1990https://hdl.handle.net/1884/87434Orientadora: Momoyo NakanoContem 9 fots. coladasDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias BiologicasResumo: As gliceraldeído-3-fosfato desidrogenases(E.C.1.2.1.12) de fontes tumorais (células HeLa e tecido tumoral de mama) foram isoladas e purificadas, e suas propriedades cinéticas estudadas comparativamente às enzimas de outras fontes normais. As propriedades imunológicas da GPDH de células HeLa foram também estudadas. A pureza da GPDH de células HeLa foi mostrada por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS, apresentando uma única banda correspondente à subunidade com PM de 36.000. 0 pH ótimo encontrado para ambas as enzimas foi de 8,2. Os valores de Km para a GPDH de células HeLa foram determinados parado gliceraldeído-3-fosfato e para o NAD+ sendo em torno de 1,0 x 10-4M e 3,07 x 10-5M, respectivamente. Para a GPDH de tecido tumoral de mama, os valores de Km para o gliçeraldeído-3-fosfato e o NAD foram de 8,26 x 10-5M e 1,53 x 10-5M, respectivamente. Foi demonstrado que o I||ADH é um inibidor competitivo em relação as NAD+, sendo o Ki de 3,25 x 10-5M e 5,35 x 10-5M, respectivamente para as GPDHs de células HeLa e de tecido tumoral de mama. 0 ATP também foi demonstrado ser um inibidor competitivo em relação ao NAD+ sendo o Ki de 2,61 x 10-3M para a GPDH de células HeLa. A imunoeletroforese do antígeno (GPDH de células HeLa) apresentou uma única banda de precipitina com sua respectiva imunoglobulina, demonstrando a pureza de preparação da GPDH desta fonte. A imunoeletroforese do anticorpo anti-GPDH de células HeLa mostrou 3 bandas de precipitina, com o respectivo antígeno provavelmente correspondentes aos tres tipos mais comuns de imunoglobulinas (IgG, IgM, IgA). Quando testada frente aos anticorpos anti-GPDH de músculo deAnas sp. (pato), a GPDH de células HeLa apresentou determinantes imunologicamente idênticos ao dos antígenos de músculo de Caiman sp. (jacaré) e tumor de mama humano, mas apenas alguns determinantes antigênicos imunologicamente idênticos em relação ao antígeno de músculo de Anas sp.. Quando testada frente aos anticorpos anti-GPDH de células HeLa, a GPDH destas células apresentou os determinantes antigênicos imunologicamente idênticos aos antígenos de Caiman sp. e de tumor de mama humano. Não houve porém, formação de banda de precipitina frente ao antígeno de músculo de Anas sp., indicando que o grupo determinante correspondente provavelmente foi modificado ou perdido. As GPDHs de células HeLa e de tecido tumoral de mama humano não demonstraram diferenças físico-químicas significativas em relação às GPDHs de outras fontes já estudadas.xiii, 76 f. : 16 il.application/pdfDisponível em formato digitalDesidrogenasesCelulas HeLaD-gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase de celulas HeLa : purificação, estudos cineticos e imunologicosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALD - D - ELISA MAINES GOMES.pdfapplication/pdf7361423https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/87434/1/D%20-%20D%20-%20ELISA%20MAINES%20GOMES.pdf50affa1d3c83d8ad59ef96bab8b20ec6MD51open access1884/874342024-04-26 15:50:58.091open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/87434Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082024-04-26T18:50:58Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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