Identificaçao de marcador embrionário em tumor de córtex adrenal de crianças
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| Data de Publicação: | 2004 |
| Tipo de documento: | Dissertação |
| Idioma: | por |
| Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
| Texto Completo: | https://hdl.handle.net/1884/33455 |
Resumo: | Orientador : Bonald C. de Figueiredo |
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Rodrigues, Giovanna AssisUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasFigueiredo, Bonald Cavalcante de, 1957-2020-07-17T00:20:28Z2020-07-17T00:20:28Z2004https://hdl.handle.net/1884/33455Orientador : Bonald C. de FigueiredoDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde, Programa de Pós-Graduaçao em Ciencias Farmaceuticas. Defesa: Curitiba, 2004Inclui bibliografia e anexosResumo: Aproximadamente 90% dos tumores adrenocorticais em crianças (TAC) no estado do Paraná apresentam a mutação R337H Tp53 nas células da linhagem germinativa, um fator de supressão tumoral. Os hormônios sexuais, o cortisol e outros hormônios em excesso nos TACs são os responsáveis pelo aparecimento dos sinais e sintomas mais freqüentes: síndrome virilizante e síndrome de Cushing. A grande maioria dos pacientes com TAC é diagnosticada até os três anos de idade, porém os responsáveis pelas crianças relatam que, normalmente, os sintomas começaram a surgir cerca de seis meses a dois anos antes do diagnóstico. Diante dessas observações e de uma série de diferenças entre tumores de crianças e de adultos, formulou-se a hipótese de que o tumor de crianças poderia surgir durante o período embrionário. O presente trabalho tem como objetivo testar essa hipótese por meio da identificação de um marcador embrionário em amostras de TAC. Para tal foi realizada a pesquisa de, fosfatase alcalina placentária (PLAP) e CD30, referidos como possíveis marcadores embrionários na identificação de tumores de testículos e ovários, os quais apresentam função esteroidogênica a exemplo da adrenal. A técnica de imunohistoquímica (IH) foi utilizada para mostrar PLAP e CD30 em cortes embebidos e parafina, e outras duas proteínas, 17 -hidroxilase (17-OHase) e Tp53, foram utilizadas como controles. A fim de confirmar a presença do(s) marcador(es) que apresentar(em) resultado(s) positivo(s) na técnica de IH e o peso molecular esperado nas amostras de TAC, foi utilizada também a técnica de western blotting em amostras congeladas de TAC, empregando como controles positivos, amostra de placenta e PLAP comercial. Os resultados obtidos na IH revelaram que CD30 (apenas 5,1% de positividade nas amostras pesquisadas) não é um marcador específico ou confiável, ao passo que PLAP foi encontrada em 36,2% dos TACs. O percentual baixo de imunopositividade encontrado para 17-OHase e Tp53 em relação ao esperado (aproximadamente 95% e 90%, respectivamente) pode ser justificado por problemas no preparo das amostras do tumor ou na incubação com os anticorpos. Este motivo pode também sugerir que pode haver um percentual maior de TACs de crianças positivos para PLAP na IH. A presença de PLAP foi confirmada no western blotting que revelou também o peso molecular esperado, entre 70 e 75 KDa. Os resultados obtidos para 17-OHase e p53 mostraram as condições do material pesquisado, enquanto os resultados positivos para PLAP são as melhores evidências de que TAC de crianças é de origem embrionária. Entretanto, por ter havido provavelmente baixa sensibilidade para PLAP na IH, o presente trabalho não pode assegurar a existência de TAC negativo para PLAP. Sabe-se que, em algum momento da embriogênese do córtex adrenal, ocorre falha do R337H Tp53 ou de outros mutantes e formação do TAC, cujo crescimento ocorre a diferentes velocidades. Novas pesquisas com PLAP e outros possíveis marcadores em tecidos de TAC e em soro de pacientes possibilitarão um diagnóstico precoce das recidivas, que está freqüentemente associado a um prognóstico mais favorável.Abstract: Approximately 97% of the pediatric adrenocortical tumors (ACT) from Paraná present the germline mutation R337H Tp53. This allele has been considered to be responsible for the increased incidence of ACT in children from this state in southern Brazil. Sex hormones, cortisol and other hormones produced at high levels in ACT are responsible for the most common clinical presentations: virilizing syndrome and Cushing's syndrome. Most of the patients with ACTs are diagnosed in the first three postnatal years, however, parents have reported onset of signs and symptoms six months to two years earlier. Based upon these observations and on a number of differences between children and adults, a hypothesis has been formulated to propose that most cases of pediatric ACTs are developed during the embryonic period. The present work was proposed to test the embryonic origin of ACT through the identification of an embryonic marker in ACT samples. To address this objective, two candidates were selected: placental alkaline phosphatase (PLAP) and CD30, both reported as possible embryonic markers for identification of testis seminoma and ovary cancer, which present steroidogenic tissue as the adrenal córtex. The immunohistochemistry technique (IHC) was used to investigate the presence of PLAP and CD30 in paraffin-embedded sections, while 17 -hydroxilase (17-OHase) and p53, were used as controls. In order to confirm the presence of the marker that show a positive result by IH and its molecular weight, another technique, western blotting was used to investigate frozen samples of ACT, employing as positive controls placental tissue and commercial PLAP. The IHC findings have revealed that CD30 (only 5,1% of the samples were positive) is not a specific or safe marker, while PLAP was found to be positive in 36,2% of the ACTs. The low frequency of positive cases for 17-OHase and p53 in relation to expected frequencies (approximately 95% and 90%, respectively) may be explained by differences in assay conditions such as sample preparation and antibody incubation. This may be also the reason to suggest that frequency of positive results for PLAP in IH may be probably higher. The presence of PLAP was confirmed in the western blotting, which has revealed the expected molecular weight, between 70 and 75 KDa. The obtained results for 17-OHase and p53 have contributed to evaluate the sample conditions, while the PLAP results are the best evidence to date that children's ACT is from embryonic origin. However, due to low IHC sensitivity results for PLAP, this study could not determine, which samples were really negative for PLAP, which would be indicated to test the negative PLAP expression hypothesis in the marjority of adult ACTs. This study proposes that at a certain moment of the adrenocortical development there must be a failure of the remaining R337H Tp53 and/or of other mutants that contribute to develop cancer cells that will form ACT. According to the profile of each ACT, it is expected different growth rates of the tumor, and further studies with PLAP and other candidates will contribute to reach earlier diagnosis of recurrences, which is frequently associated with better prognosis.xiii, 89f. : il. algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalCâncerAdrenocorticalTesesIdentificaçao de marcador embrionário em tumor de córtex adrenal de criançasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - GIOVANNA ASSIS RODRIGUES.pdfapplication/pdf707426https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/33455/1/R%20-%20D%20-%20GIOVANNA%20ASSIS%20RODRIGUES.pdf66993528a496f846c1aeda7819b30dffMD51open accessTEXTR - D - GIOVANNA ASSIS RODRIGUES.pdf.txtExtracted Texttext/plain178495https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/33455/2/R%20-%20D%20-%20GIOVANNA%20ASSIS%20RODRIGUES.pdf.txt4a9b94e338a6b3ac5a8c27a4e48308d2MD52open accessTHUMBNAILR - D - GIOVANNA ASSIS RODRIGUES.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1112https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/33455/3/R%20-%20D%20-%20GIOVANNA%20ASSIS%20RODRIGUES.pdf.jpg7a3ab568cae6548a53d180696ead52deMD53open access1884/334552020-07-16 21:20:28.677open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/33455Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082020-07-17T00:20:28Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
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