Avaliação in vitro da expressão de MCP-1 envolvida na disfunção Endotelial causada por produtos de glicação avançadas (AGES)
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2013 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1884/32114 |
Resumo: | Resumo: A interação de toxinas urêmicas, tais como os produtos de glicação avançada (AGES), com o endotélio vascular desempenha um importante papel na fisiopatologia da disfunção endotelial relacionada à doença renal crônica (DRC). Estudos vêm demonstrando que a via PKC-? é uma das principais vias mediadoras deste processo, levando a expressão de diversas moléculas, dentre elas o monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1). O MCP-1 atua no recrutamento de monócitos do sangue periférico para a parede vascular, exercendo um papel essencial na formação da placa aterosclerótica e progressão da doença cardiovascular (DCV). O presente trabalho teve como objetivo avaliar in vitro o papel dos AGES na produção de MCP-1 via PKC-?. Para tanto, células endoteliais de veia de cordão umbilical (HUVECs) foram extraídas e cultivadas em meio MEM-199 suplementado. Células U-937 (monócitos) foram cultivadas em meio RPMI suplementado. Foi estabelecido também o modelo de co-cultivo HUVECs + monócitos onde os tratamentos foram realizados logo após a inserção dos monócitos sobre as HUVECs. Os AGES foram preparados por reação de glicação da albumina bovina (BSA) com glicose. As HUVECs, monócitos e co-cultivo HUVECs + monócitos foram tratadas com BSA, AGES e AGES + inibidor da via PKC-? e incubadas por 0, 3 e 6 horas. As HUVECs expostas aos AGES mostraram um aumento significativo (P<0,05) nos níveis de MCP-1 após 3 e 6 horas (72±9; 77±12pg/mL, respectivamente), em comparação ao tempo 0 de tratamento (38±7pg/mL). Entretanto, HUVECs expostas aos AGES acrescido de inibidor da via PKC-? demonstraram uma diminuição significativa (P<0,005) na expressão de MCP-1 após 3 e 6 horas (30±8; 20±7pg/mL, respectivamente), quando comparada ao tratamento apenas com AGES. O grupos de tratamento dos monócitos não evidenciaram diferenças significativas nas dosagens de MCP-1 após 3 e 6 horas. No modelo de co-cultivo HUVECs + monócitos, não foi observado diferença significativa nos níveis de MCP-1 dosados, sugerindo que uma cinética de tratamento maior seja necessária para evidenciar alterações na expressão dessa molécula. Os resultados alcançados propõem que a via PKC-? contribui de forma importante na expressão de MCP-1 principalmente pelas HUVECs, mas as dosagens em monócitos sugerem que essa via também seja responsável pela produção de MCP-1 nessas células. Já no co-cultivo HUVECs + monócitos, a produção de MCP-1 esteve próxima dos níveis basais, levantando novos questionamentos acerca do comportamento de expressão dessa molécula após a adesão de monócitos à camada endotelial. Entretanto, mais experimentos devem ser elaborados para melhor entendimento dos mecanismos relacionados à disfunção endotelial mediada por AGES. |
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Rempel, Lisienny Campoli TonoUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica)Stinghen, Andréa Emilia Marques2013-09-18T20:03:32Z2013-09-18T20:03:32Z2013-09-18http://hdl.handle.net/1884/32114Resumo: A interação de toxinas urêmicas, tais como os produtos de glicação avançada (AGES), com o endotélio vascular desempenha um importante papel na fisiopatologia da disfunção endotelial relacionada à doença renal crônica (DRC). Estudos vêm demonstrando que a via PKC-? é uma das principais vias mediadoras deste processo, levando a expressão de diversas moléculas, dentre elas o monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1). O MCP-1 atua no recrutamento de monócitos do sangue periférico para a parede vascular, exercendo um papel essencial na formação da placa aterosclerótica e progressão da doença cardiovascular (DCV). O presente trabalho teve como objetivo avaliar in vitro o papel dos AGES na produção de MCP-1 via PKC-?. Para tanto, células endoteliais de veia de cordão umbilical (HUVECs) foram extraídas e cultivadas em meio MEM-199 suplementado. Células U-937 (monócitos) foram cultivadas em meio RPMI suplementado. Foi estabelecido também o modelo de co-cultivo HUVECs + monócitos onde os tratamentos foram realizados logo após a inserção dos monócitos sobre as HUVECs. Os AGES foram preparados por reação de glicação da albumina bovina (BSA) com glicose. As HUVECs, monócitos e co-cultivo HUVECs + monócitos foram tratadas com BSA, AGES e AGES + inibidor da via PKC-? e incubadas por 0, 3 e 6 horas. As HUVECs expostas aos AGES mostraram um aumento significativo (P<0,05) nos níveis de MCP-1 após 3 e 6 horas (72±9; 77±12pg/mL, respectivamente), em comparação ao tempo 0 de tratamento (38±7pg/mL). Entretanto, HUVECs expostas aos AGES acrescido de inibidor da via PKC-? demonstraram uma diminuição significativa (P<0,005) na expressão de MCP-1 após 3 e 6 horas (30±8; 20±7pg/mL, respectivamente), quando comparada ao tratamento apenas com AGES. O grupos de tratamento dos monócitos não evidenciaram diferenças significativas nas dosagens de MCP-1 após 3 e 6 horas. No modelo de co-cultivo HUVECs + monócitos, não foi observado diferença significativa nos níveis de MCP-1 dosados, sugerindo que uma cinética de tratamento maior seja necessária para evidenciar alterações na expressão dessa molécula. Os resultados alcançados propõem que a via PKC-? contribui de forma importante na expressão de MCP-1 principalmente pelas HUVECs, mas as dosagens em monócitos sugerem que essa via também seja responsável pela produção de MCP-1 nessas células. Já no co-cultivo HUVECs + monócitos, a produção de MCP-1 esteve próxima dos níveis basais, levantando novos questionamentos acerca do comportamento de expressão dessa molécula após a adesão de monócitos à camada endotelial. Entretanto, mais experimentos devem ser elaborados para melhor entendimento dos mecanismos relacionados à disfunção endotelial mediada por AGES.application/pdfDissertaçõesRins - DoençasAvaliação in vitro da expressão de MCP-1 envolvida na disfunção Endotelial causada por produtos de glicação avançadas (AGES)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - LISIENNY CAMPOLI TONO REMPEL.pdfapplication/pdf1853803https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/32114/1/R%20-%20D%20-%20LISIENNY%20CAMPOLI%20TONO%20REMPEL.pdfcca5618c76954eeab2b0e407f2d9ff1aMD51open accessTEXTR - D - LISIENNY CAMPOLI TONO REMPEL.pdf.txtR - D - LISIENNY CAMPOLI TONO REMPEL.pdf.txtExtracted Texttext/plain100534https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/32114/2/R%20-%20D%20-%20LISIENNY%20CAMPOLI%20TONO%20REMPEL.pdf.txt15d0d65170edc65fb1d02f8eb5fbcc50MD52open accessTHUMBNAILR - D - LISIENNY CAMPOLI TONO REMPEL.pdf.jpgR - D - LISIENNY CAMPOLI TONO REMPEL.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1222https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/32114/3/R%20-%20D%20-%20LISIENNY%20CAMPOLI%20TONO%20REMPEL.pdf.jpg29b3b6659d28dc4cf33721df134914a4MD53open access1884/321142016-04-13 03:22:25.731open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/32114Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-04-13T06:22:25Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
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