Estudo da via KEAP1/NRF2 em células endoteliais expostas ao estímulo urêmico

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Couto, Letícia Baby, 1990-
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/69731
Resumo: Orientadora: Profª Drª Lia Sumie Nakao
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spelling Couto, Letícia Baby, 1990-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e PatologiaNakao, Lia Sumie2021-03-10T00:47:39Z2021-03-10T00:47:39Z2015https://hdl.handle.net/1884/69731Orientadora: Profª Drª Lia Sumie NakaoDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa : Curitiba, 25/03/2015Inclui referências: p.46-53Resumo: Doenças cardiovasculares são a principal causa de morte em doentes renais crônicos. O estresse oxidativo participa de vários eventos da patogenia, progressão e complicações da doença renal crônica (DRC), assim como do comprometimento do sistema cardiovas-cular neste contexto. A via de Keap1/Nrf2 tem sido reconhecida como um mecanismo adaptativo importante da resposta antioxidante a diversas condições patológicas, como diabetes e doenças neurodegenerativas. Contudo, na DRC, esta via mostrou-se inativada após 8 semanas no rim e na artéria aorta no modelo de nefrectomia de 5/6 em ratos. Como as células endoteliais são protagonistas do desenvolvimento de doenças cardio-vasculares durante a progressão da DRC, neste trabalho avaliamos a resposta da via Keap1/Nrf2 em células endoteliais de aorta de coelho expostas a um pool de soro urêmico humano ou não urêmico. Verificamos que o soro urêmico induz a ativação da via de Keap1/Nrf2, observada pela translocação de Nrf2 para o núcleo e pela expressão gênica de heme oxigenase-1 (HO1) e cisteína ligase (GCLC), por PCR em tempo real, após 5h de tratamento. Após 24h, estes parâmetros voltaram ao estado basal, indicando uma inativação da via. Neste tempo, o gene de Keap1 estava cerca de 26x vezes mais ex-presso nas células tratadas com o soro urêmico do que com soro não urêmico. Indoxil sulfato é um metabólito que se acumula na DRC, tornando-se então uma toxina urêmica. Avaliamos o efeito desta toxina isoladamente na resposta celular quanto à expressão gênica de HO1, GCLC e Keap1. Os resultados mostraram que células expostas ao indoxil sulfato por 5h apresentam uma expressão significativamente mais alta do gene HO1, mas não do gene GCLC, em relação ao controle negativo. Este aumento significativo de HO1 desaparece após 24h. Em contrapartida, há um aumento não significativo de Keap1 em células tratadas por 24h. Estes dados estão de acordo com os resultados de células ex-postas ao soro urêmico. No conjunto, nossos dados evidenciaram uma ativação transi-ente da via de Keap1/Nrf2 nas células endoteliais expostas ao estimulo urêmico e con-firma que a uremia prolongada é capaz de inativar esta via. Palavras-chave: Keap1/Nrf2; Células endoteliais; Heme oxigenase 1 (HO1); Cisteína li-gase (GCLC); Estímulo urêmico.Abstract: Cardiovascular diseases are the main cause of death in chronic kidney disease (CKD) patients. The oxidative stress takes place in several events of CKD pathogenesis, pro-gression and complications, including the cardiovascular events. The Keap1/Nrf2 pathway has been recognized as an important adaptive mechanism of antioxidant response in var-ious pathological conditions, such as diabetes and neurodegenerative diseases. In CKD, however, this, pathway was shown to be inactivated after 8 weeks, both in the kidney and aorta of 5/6 nephrectomized rats. Given that endothelial cells have an essential role in cardiovascular diseases development during CKD progression, in the present study we evaluated Keap1/Nrf2 pathway response in rabbit aorta endothelial cells exposed to hu-man pools of uremic or of non-uremic sera. Our results showed that uremic serum induced the activation of the Keap1/Nrf2 pathway, as determined by the Nrf2 translocation to the nucleus, and by the expression (qPCR) of heme oxygenase 1 (HO1) and cysteine ligase (GCLC) genes after 5 h treatment. After 24 hours, these parameters retuned to the basal levels, indicating inactivation of the pathway. At this time, Keap1 gene was 26x more ex-pressed in cells treated with uremic serum as compared with the non-uremic serum. In-doxyl sulfate is a metabolite that accumulates in CKD, becoming an uremic toxin. We evaluated the effect of this toxin itself in the cellular response determining HO1,GCLC and Keap1 gene expression. The results showed that cells exposed for 5 hours to indoxyl sulfate present significantly higher expression of HO1 gene, but not of GCLC, compared with the negative control. This increased HO1 expression returned to the basal level after 24 hours. These data are in agreement with the results of the cells exposed to uremic serum. Altogether, our data demonstrated a transient activation of the Keap1/Nrf2 path-way in endothelial cells exposed to uremic stimulus, and confirmed that a long uremic condition is able to inactivate this pathway. Key words: Keap1/Nrf2; endothelial cells; Heme oxygenase 1 (HO1); Cysteine ligase (GCLC); Uremic stimulus.53 p. : il. (algumas color.).application/pdfSistema cardiovascular - DoençasEstresse oxidativoMicrobiologiaParasitologiaEstudo da via KEAP1/NRF2 em células endoteliais expostas ao estímulo urêmicoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - LETICIA BABY COUTO.pdfapplication/pdf3087202https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/69731/1/R%20-%20D%20-%20LETICIA%20BABY%20COUTO.pdfd100b9bc691ef47fc9f93cbe09039363MD51open access1884/697312021-03-09 21:47:39.404open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/69731Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082021-03-10T00:47:39Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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