Análise dos polissacarídeos presentes em Camelia sinensis e desenvolvimento de cromatografia líquida bidimensional abrangente para compostos de baixa massa molecular

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Scoparo, Camila Toledo
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/26711
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Marcello Iacomini
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spelling Souza, Lauro Mera deUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Iacomini, Marcello, 1947-Scoparo, Camila Toledo2024-02-01T17:45:27Z2024-02-01T17:45:27Z2011https://hdl.handle.net/1884/26711Orientador: Prof. Dr. Marcello IacominiCoorientador: Dr. Lauro Mera de SouzaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 16/10/2011Inclui referênciasResumo: A Camellia sinensis e uma especie de planta cujas folhas sao utilizadas amplamente na obtencao de infusoes popularmente conhecidas como ¡§cha¡¨, sendo o mais conhecido o ¡§cha verde¡¨. Existem varios tipos de chas obtidos de C. sinensis, a principal diferenca entre eles esta baseada no processo de auto-oxidacao catalisado pelas enzimas polifenol-oxidase e peroxidase. Assim, os chas sao classificados em nao oxidados (cha verde e branco), semi-oxidado (cha oolong), oxidado (cha preto) e pos-fermentado (cha pu-erh). No presente trabalho foram avaliados os polissacarideos presentes no extrato aquoso dos chas verde e preto, assim como os compostos de baixa massa molecular presentes no extrato hidroalcoolico dos mesmos. Para o cha verde, apos processo de fracionamento por congelamento e degelo, as analises de composicao monossacaridica, HPSEC-MALLS e espectroscopia de RMN, indicaram a presenca de acido poligalacturonico com ligacoes 1„_4, alem da presenca de uma arabinogalactana. O polissacarideo extraido do cha preto apresentou tambem arabinose, galactose e acido galacturonico como componentes majoritarios, sugerindo a presenca de uma estrutura pectica e de uma arabinogalactana do tipo II. Os polissacarideos foram testados quanto as suas atividades antissepse, onde apresentaram discreta reducao da letalidade de camundongos, e uma diminuicao da atividade das enzimas mieloperoxidades, confirmando um efeito positivo desses polissacarideos na sepse. Tambem sao apresentadas neste trabalho duas metodologias desenvolvidas para alcancar uma analise detalhada dos extratos hidroalcoolicos do cha verde e preto. Na primeira etapa, os extratos foram fracionados em agua, n-butanol, acetato de etila e cloroformio para separar os compostos de acordo com sua polaridade, rendendo amostras menos complexas para serem analisadas na cromatografia liquida de ultra alta performance acoplada ao espectrometro de massas (UHPLC-MS). Adicionalmente, uma tecnica bidimensional abrangente da cromatografia liquida (2D-LC) que emprega a cromatografia da exclusao por tamanho (SEC) x fase reversa (C18) foi desenvolvida. Os seguintes compostos foram identificados (com base no tempo de retencao, espectros de UV, fragmentacao por MS e comparacao com padroes e literatura): catequinas; teaflavinas e seus derivados galatos; caempferol, quercetina e miricetina mono, di-, tri e tetraglicosideos; esteres do acido quinico, acido galico e acidos hidroxicinamicos; alcaloides de purina, tais como a cafeina e a teobromina, alem de lipideos. Adicionalmente, foram encontrados compostos pela primeira vez relatados em C.sinensis, como isomeros de diversas saponinas ja conhecidas e quatro glicosideos de miricetina, quercetina e caempferol, contendo esteres de acido galico. Os extratos hidroalcoolicos tambem foram submetidos a avaliacao de sua atividade gastroprotetora, sendo que estes reduziram significativamente a ocorrencia de lesao gastrica induzida por etanol.Abstract: The Camellia sinensis is a species of plant whose leaves are widely used in infusions popularly known as "tea", such as ¡§green tea¡¨. There are many types of tea from C. sinensis, their difference is based on the process of auto-oxidation catalyzed by the enzymes polyphenoloxidase and peroxidase, so they are classified in non-oxidized (green and white tea), semi-oxidized (oolong tea), oxidized (black tea) and post-fermented (pu-erh tea). In the present study we evaluated the polysacharides present in the aqueous extract of green and black teas, as well as low molecular weight compounds present in hydro-alcoholic extract of same. In green tea, after fractionation process by freezing-thawing, monosaccharide composition, HPSEC-MALLS and NMR analyses, the presence of a galacturonic acid 1„_4 linked, as well as an arabingalactan were confirmed. Similarly, the polysaccharides from black tea also contained arabinose, galactose and galacturonic acid as the main components, suggesting a pectic structure and arabingalactan. The polysacharides were tested for their anti sepsis activity, which showed a discreet reduction of the mortality of mice, and a decrease in activity of the enzymes mieloperoxidades, that confirms the positive effect of the polysacharides in the sepsis process. Also, it were described two methodologies aiming to achieve a comprehensive analysis of hydro-alcoholic extracts of C. sinensis. In the first one, the extracts were partitioned in water, n-buthanol, ethyl acetate and chloroform for fractionating compounds according to their polarity, yielding less complex samples to be analyzed by ultra high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UHPLC-MS). Additionally, a comprehensive bidimensional liquid chromatography (2D-LC) employing size exclusion chromatography (SEC) x reversed phase (C18) was developed. Based on their retention time, UV-spectra, MS-fragmentation profile and by comparison with literature, the following compounds were identified: catechins; theaflavins and their gallate derivatives; mono-, di-, tri- and tetraglycosides of kaempferol, quercetin and myricetin; esters from quinic, gallic and hydroxycinnamic acids; purine alkaloids, such as caffeine and theobromine, and so lipids. Additionally, unreported compounds in C.sinensis were now found, such as isomers of many known saponins and esters of gallic acid of four glycosides of myricetin, quercetin and kaempferol. The hydro-alcoholic extracts were also subjected to evaluation of their gastroprotective activity, and these have significantly reduced the occurrence of gastric lesions induced by ethanol treatment.107 f. : il. [algumas color.] ; 30 cm.application/pdfDisponível em formato digitalTesesChá verdeAnálise cromatográficaCromatografia líquidaBioquímicaEspectrometria de massaAnálise dos polissacarídeos presentes em Camelia sinensis e desenvolvimento de cromatografia líquida bidimensional abrangente para compostos de baixa massa molecularinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALDISSERTACAO CAMILA SCOPARO.pdfapplication/pdf2174610https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26711/1/DISSERTACAO%20CAMILA%20SCOPARO.pdf90326961269d0a94ffbab5e7123b2774MD51open accessTEXTDISSERTACAO CAMILA SCOPARO.pdf.txtExtracted Texttext/plain173751https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26711/2/DISSERTACAO%20CAMILA%20SCOPARO.pdf.txt192948e06df64eb74012cbab52a6f804MD52open accessTHUMBNAILDISSERTACAO CAMILA SCOPARO.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1201https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26711/3/DISSERTACAO%20CAMILA%20SCOPARO.pdf.jpg0b980110aefb85b39687dfa1bd1eae5fMD53open access1884/267112024-02-01 14:45:27.236open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/26711Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082024-02-01T17:45:27Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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