Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Irioda, Ana Carolina
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/26521
Resumo: Orientadora : Profa. Dra. Katherine Athayde Teixeira de Carvalho
id UFPR_56042d949a3c65e447d6af763e67b8d5
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/26521
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Carvalho, Katherine Athayde Teixeira deUniversidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e BiotecnologiaIrioda, Ana Carolina2024-04-08T19:21:44Z2024-04-08T19:21:44Z2010https://hdl.handle.net/1884/26521Orientadora : Profa. Dra. Katherine Athayde Teixeira de CarvalhoDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 20/12/2010Bibliografia: fls. 72-79Área de concentração: Saúde animal e humanaResumo: As celulas-tronco de origem adulta surgem como promessa terapeutica na medicina regenerativa podendo ser encontradas em diversos tecidos como o adiposo. Com as perspectivas da criacao de um banco de celula-tronco para pesquisa e posterior uso terapeutico, o estudo da criopreservacao dessas celulas urge, a fim de garantir que essas celulas apos o descongelamento permanecam viaveis e funcionais. Objetivos: Comparar as celulas-tronco do tecido adiposo antes da criopreservacao e apos o seu descongelamento quanto a: a) indice de proliferacao e capacidade de formar colonias b) expressao das moleculas de superficies em especial a integrina ƒ¿4; c) capacidade de diferenciacao d) viabilidade e integridade celular. Metodos: Celulas-tronco adultas foram obtidas do tecido adiposo de 10 mulheres e 2 homens, saudaveis pela tecnica de lipoaspiracao, realizada por cirurgioes plasticos e apos o consentimento informado. O isolamento das celulas foi realizado atraves de digestao enzimatica com colagenase tipo I posterior cultivo em DMEM/F12 suplementado com 10% de SFB e 100U/mL de Penicilina/100ƒÊg/mL de Estreptomicina. Foi calculado o indice de proliferacao celular da primeira a terceira passagem para cada amostra. Realizadas analises de unidade formadora de colonia na segunda passagem, as celulas foram submetidas a diferenciacao adipogenica e osteogenica com auxilio de meios indutores. A Imunofenotipagem atraves de citometria de fluxo (FACS Calibur; Becton Dickinson, USA), utilizando-se marcadores: CD34, CD45, CD49d, CD73, CD90, CD105, anexina V e 7-AAD, seguidas do processo de criopreservacao, precedido de congelamento programavel (Nicool LM10). Vinte dias apos, as celulas foram descongeladas e os testes repetidos. Resultados: Rendimento celular: 9,09 } 4,55 X 106 celulas/mL isoladas. Indice de proliferacao antes da criopreservacao: Passagens 1= 0,24; 2= 21,33; 3= 13,03 (p=0,001), respectivamente; passagem 3=17,43 }4,11 apos descongelamento (p=0,07). Unidade formadora de colonia antes da criopreservacao: 28,08 % } 7,06%, apos o descongelamento 21,51% } 6,61% (p=0,001).Todas as amostras induzidas tiveram diferenciacao adipogenica e osteogenica, antes da criopreservacao e apos o descongelamento. A analise imunofenotipica demonstrou as seguintes expressoes antes da criopreservacao: CD34- (98,88% } 1,08%), CD45- (99,79% } 0,22%), CD49d+ (88,67% } 6,55), CD90+ (99,55 } 0,07%), CD73+ (99,57% } 0,43%) e CD105+ (99,4% } ,64%); Apos o descongelamento: CD34- (99,26% } 0,61%, p= 0,11), CD45- (99,8% } 0,14%, p= 0,79), CD49d+ (77,8% } 14,45%, p= 0,01), CD73+ (99,5% } 0,43%, p= 0,53), CD90+(99,45 } 0,7%, p= 0,62), CD105+ (98,26% } 2,07%, p= 0,05). Viabilidade celular (7-AAD-) e apoptose (Anexina V-) antes da criopreservacao: 91,39% } 5,85%, 91,34% } 4,54%; apos descongelamento das celulas: 76,31% } 13,33% (p= 0,001), 74,99% } 14,19% (p= 0,003), respectivamente. Conclusao: As celulas-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo mantem suas caracteristicas imunofenotipicas, viabilidade, capacidades de proliferacao e de diferenciacao apos o descongelamento das celulas criopreservadas, a excecao da integrina ƒ¿4 (CD 49d), uma molecula de adesao que participa da integracao da celula no tecido hospedeiro.Abstract: Adult stem-cells emerge as a therapeutic promise in regenerative medicine such as adipose. From the perspective of creation of a stem-cell bank for research and there after therapeutic use, the study of cryopreservation of these cells urge. However, to the safety of this technique, some criteria must be established in order to guarantee that cells after thawing remain viable and functional. Objective: To compare stem-cells of adipose tissue before cryopreservation and after thawing: a) proliferation index and capacity of colony forming; b) cell viability and integrity; c) differentiation capacity; d) expression of surface molecules, especially integrin á4; d) Methods: Adult stem-cells were obtained from adipose tissues of 12 adult healthy donors (10 female and two male) by the technique of liposuction, performed by plastic surgeons with informed consent. The isolation was performed by enzymatic digestion with collagenase type I, and cells were cultured on DMEM/F12 supplemented with 10% of Calf Fetal Serum, 100 units/mL of penicillin and 100 ìg/mL of Penicillin/Streptomycin. It was calculate the index of cellular proliferation from the first to the third passage to each sample and performed analyses of Colony Forming Units. At the second passage, cells were submitted to adipogenic and osteogenic differentiation using inducing media. Immunophenotyping using flow cytometer (FACS Calibur, Becton Dickinson, USA), utilizing the markers CD34, CD45,CD49d, CD73, CD90, CD105, annexin V and 7-AAD, followed of cryopreservation process, with programmed freezing (Nicool LM10). After 20 days, the cells were thawed and tests were repeated. Results: Cellular yield: 9.09 ± 4.55 X 106 cells/mL. Proliferation index, Passage 1 = 0.24 ± 0.12; 2 = 21.33 ± 8.48; 3 = 13.03 ± 5.38 (p=0.001); passage 3=17,43±4,11, after thaw (p=0.07). Colony forming units before cryopreservation: 28.08% ± 7.06%, after thaw 21.51% ± 6.61% (p= 0.001). All samples induced underwent adipogenic and osteogenic differentiation before cryopreservation and after thawing. The immunophenotypic analysis demonstrated the following expression pattern before cryopreservation: CD34- (98.88% ± 1.08%), CD45- (99.79% ± 0.22%), CD49d+ (88.67% ± 6.55), CD90+ (99.55 ± 0.07%), CD73+ (99.57% ± 0.43%) e CD105+ (99.4% ± 0.64%). After thawing: CD34- (99.26% ± 0.61%, p= 0.11), CD45- (99.8% ± 0.14%, p= 0.79), CD49d+ (77.8% ± 14.45%, p 0.01), CD73+ (99.5% ± 0.43%, p= 0.53), CD90+(99.45 ± 0.7%, p= 0.62), CD105+ (98.26% ± 2.07%, p= 0.05). Cell viability (7-AAD-) and apoptosis (Annexin V-) before cryopreservation: 91.39% ± 5.85%, 91.34% ± 4.54%; after cell thawing: 76.31% ± 13.33% (p= 0.001), 74.99% ± 14.19% (p= 0.003), respectively. Conclusion: Mesenchymal stem-cells derived from adipose tissue maintain their immunophenotypic characteristics as well viabilitiy, proliferation and differentiation capacities after thawing of cryopreserved cells. The exception is integrin á4 (CD 49d), an adhesion molecule involved in the integration of the cell in the host tissue.107f. : il. [algumas color.], grafs., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalCélulas-troncoTecido adiposoMoleculasTecnologia químicaAvaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservaçãoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALAna Carolina Irioda.pdfapplication/pdf2509782https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26521/1/Ana%20Carolina%20Irioda.pdfc07a973eb0fd3ea621e22850d5232081MD51open accessTEXTAna Carolina Irioda.pdf.txtExtracted Texttext/plain157635https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26521/2/Ana%20Carolina%20Irioda.pdf.txt8435f94edf116c7d83096ef360b6a14bMD52open accessTHUMBNAILAna Carolina Irioda.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1198https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26521/3/Ana%20Carolina%20Irioda.pdf.jpgec6f9bad0f8b399d97eaec4fac10c227MD53open access1884/265212024-04-08 16:21:44.619open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/26521Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082024-04-08T19:21:44Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
title Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
spellingShingle Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
Irioda, Ana Carolina
Células-tronco
Tecido adiposo
Moleculas
Tecnologia química
title_short Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
title_full Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
title_fullStr Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
title_full_unstemmed Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
title_sort Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação
author Irioda, Ana Carolina
author_facet Irioda, Ana Carolina
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Carvalho, Katherine Athayde Teixeira de
Universidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
dc.contributor.author.fl_str_mv Irioda, Ana Carolina
dc.subject.por.fl_str_mv Células-tronco
Tecido adiposo
Moleculas
Tecnologia química
topic Células-tronco
Tecido adiposo
Moleculas
Tecnologia química
description Orientadora : Profa. Dra. Katherine Athayde Teixeira de Carvalho
publishDate 2010
dc.date.issued.fl_str_mv 2010
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2024-04-08T19:21:44Z
dc.date.available.fl_str_mv 2024-04-08T19:21:44Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/1884/26521
url https://hdl.handle.net/1884/26521
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.pt_BR.fl_str_mv Disponível em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 107f. : il. [algumas color.], grafs., tabs.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26521/1/Ana%20Carolina%20Irioda.pdf
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26521/2/Ana%20Carolina%20Irioda.pdf.txt
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/26521/3/Ana%20Carolina%20Irioda.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv c07a973eb0fd3ea621e22850d5232081
8435f94edf116c7d83096ef360b6a14b
ec6f9bad0f8b399d97eaec4fac10c227
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898699740282880

Registros relacionados